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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 连接转化不长菌
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zeyuanzi

新虫 (小有名气)
引用回帖:
18楼: Originally posted by 木立 at 2016-10-17 08:52:38
如果确定质粒有卡那抗性，感受态没问题，那就是转化过程出了问题

有抗性，1号有长菌说明感受态之前是活的，至于有没感受能力不知怎么证明

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21楼2016-10-17 08:59:42
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zeyuanzi

新虫 (小有名气)
引用回帖:
19楼: Originally posted by dingxianlo at 2016-10-17 08:56:00
如果质粒有其他抗性基因的话可以换种抗生素试试。我可以考虑换个人做做试试，有时候一个人自己在做可能不知道哪个细节出错了。

这个课题就我一个人做，除了老师和我懂步骤，其他都不会了

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22楼2016-10-17 09:00:38
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zeyuanzi

新虫 (小有名气)
引用回帖:
20楼: Originally posted by dingxianlo at 2016-10-17 08:57:12
打错字了，是你不是我……

很感谢回复我，一月就要答辩了，我实验还有好多没做完

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23楼2016-10-17 09:01:29
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木立

新虫 (小有名气)
引用回帖:
21楼: Originally posted by zeyuanzi at 2016-10-17 08:59:42
有抗性，1号有长菌说明感受态之前是活的，至于有没感受能力不知怎么证明
...

转化实验很好做的，你再重复一下吧，如果步骤及操作没问题，那就是感受态有问题了。希望顺利。

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24楼2016-10-17 09:03:39
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ULYSSEESWB

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
重制感受态，要把阳性对照做出来（转化已验证的质粒），否则无法说明是连接问题
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25楼2016-10-17 09:06:25
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chen5805

至尊木虫 (职业作家)

资深木虫
用Amp试试，以前都用这个

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26楼2016-10-17 09:21:43
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enjoy大志

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
8楼: Originally posted by zeyuanzi at 2016-10-16 18:12:16
确定过了，是
...

有可能卡那浓度较高，调整一下浓度试一试。
我想问一下你用的感受态是什么类型的菌？我做TA克隆时用的是自制的DH5α感受态，初步筛选用的是混有Amp和X-gal的平板，倘若你的载体含有Amp表达基因，建议用蓝白斑筛选试一试。
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付出定有回报
27楼2016-10-17 11:30:06
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enjoy大志

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
肯卡那浓度过高，但也不至于一个单菌落都不长吧，你可以降低卡那浓度试一试。
你的感受态是什么类型菌？我之前做ta克隆用的是dh5α，含有表达基因Amp，则我初步筛选时蓝白斑筛选。
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付出定有回报
28楼2016-10-17 11:33:04
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zeyuanzi

新虫 (小有名气)
引用回帖:
27楼: Originally posted by enjoy大志 at 2016-10-17 11:30:06
有可能卡那浓度较高，调整一下浓度试一试。
我想问一下你用的感受态是什么类型的菌？我做TA克隆时用的是自制的DH5α感受态，初步筛选用的是混有Amp和X-gal的平板，倘若你的载体含有Amp表达基因，建议用蓝白斑筛选 ...

感受态DH5a

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29楼2016-10-17 12:46:40
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ken19860823

木虫 (正式写手)
去磷酸化后会切胶回收吗？如果回收就点1ul跑个电泳看看带。如果不回收的就跑一下回收的片段。片段回收后有Nano就测个浓度，没条件的就跑胶

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做基因修饰的老菜鸡
30楼2016-10-17 18:46:23
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