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307无尘

新虫 (初入文坛)

[交流] 双酶切回收问题

最近要从PMD19T上双酶切回收我的目的片段,可是跑电泳只能看到线性化的pMD19T,然后下面看不到我的目的片段,不知道是我胶配的有问题还是酶切过程有问题?

双酶切回收问题


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zyfskj

新虫 (著名写手)

向我乞求怜悯吧,我会狠狠拒绝的。
8楼2016-07-08 13:06:54
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307无尘

新虫 (初入文坛)


xn8008: 金币+1, 鼓励发帖交流 2016-07-07 08:25:38
marker是DL2000的,我的目的片段为620左右,大约在第三跟第四之间

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2楼2016-07-06 23:54:04
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ls2046

铁杆木虫 (职业作家)

★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
xn8008: 金币+1, 应助指数+1, 欢迎发帖交流 2016-07-09 08:03:00
要么是质粒不干净,要么是酶切体系没有做好。建议1)质粒小量酶切,先验证质粒质量和酶切效率(能否出现单一的目的条带),没有问题了进行2)酶切体系扩大,但也应该先跑一个小孔看看效果,因为胶回收的空比较大,跑起来不易观察。可以尝试把胶浓度提高一点,比如用1.2%,电压低一点,跑慢一点,效果可能好一些。
一品黄山
3楼2016-07-07 08:49:00
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不爱做实验

银虫 (正式写手)

★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
xn8008: 金币+1, 欢迎发帖交流 2016-07-09 08:03:10
酶切体系和时间要适合:
1.酶不要超过体系总体积的1/10
2.酶切时间一般2-2.5h基本可以酶切完全
3.可适当加大质粒的量
4楼2016-07-07 09:08:23
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