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junxiao0320

金虫 (小有名气)

学生

应助: 0 (幼儿园)
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虫号: 1097534
注册: 2010-09-13
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专业: 兽医传染病学

[求助] 双酶切出问题啦

现在连到T载体上了，测序也正确，要双酶切连到表达载体上，但是酶切后目的条带太暗，无法胶回收，用的是TAKARA的ECORI,SphI，起初酶切四个半小时，后来酶切按说明书半小时，结果还是这样。
请求高手，帮忙解决。

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寻找方向，前进

1楼 2011-11-17 09:25:29

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

宗德inter

铜虫 (初入文坛)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 179.6
帖子: 11
在线: 7.4小时
虫号: 1470453
注册: 2011-11-01
性别: GG
专业: 生物化学

【答案】应助回帖

★ ★
西瓜(金币+2): Good! 2011-11-17 18:58:56

看看可以考虑分布酶切，先用一种酶切上个两个小时，然后用PCR clean kit回收一下，再用第二种酶切，然后电泳，可以在第一步酶切的时候做两管，然后回收合并为一管进行下一步酶切，应该是没问题的。

赞一下(1人)

努力吧phD

2楼2011-11-17 13:50:48

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

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