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junxiao0320

金虫 (小有名气)

学生

[求助] 双酶切出问题啦

现在连到T载体上了,测序也正确,要双酶切连到表达载体上,但是酶切后目的条带太暗,无法胶回收,用的是TAKARA的ECORI,SphI,起初酶切四个半小时,后来酶切按说明书半小时,结果还是这样。
请求高手,帮忙解决。
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宗德inter

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
西瓜(金币+2): Good! 2011-11-17 18:58:56
看看可以考虑分布酶切,先用一种酶切上个两个小时,然后用PCR clean kit回收一下,再用第二种酶切,然后电泳,可以在第一步酶切的时候做两管,然后回收合并为一管进行下一步酶切,应该是没问题的。
努力吧phD
2楼2011-11-17 13:50:48
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