24小时热门版块排行榜

返回列表

玉露金风

新虫 (初入文坛)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 1
帖子: 3
在线: 44分钟
虫号: 4511240
注册: 2016-03-16

[交流] 荧光定量PCR引物问题已有7人参与

这是某个基因引物的溶解曲线图，从图看，引物能用么？

IMG_20160608_190839.jpg

回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:

求助已经有4人回复
问一个关于荧光实时定量PCR的问题已经有4人回复
实时荧光PCR引物筛选已经有0人回复
关于基因全长克隆的问题，求前辈指导！！已经有1人回复
荧光定量PCR 已经有0人回复
急求：ncbi中基因问题已经有15人回复
设计荧光定量PCR引物已经有8人回复
实时荧光定量pcr的一些问题已经有0人回复
对产电菌进行荧光PCR定量，让生工设计引物，他们说要针对具体基因已经有5人回复
关于荧光定量PCR基因扩增的问题已经有5人回复
提RNA、反转录以及荧光定量PCR的过程到底要怎样处理所有的器皿和耗材？已经有1人回复
荧光定量pcr溶解曲线好几个峰，但是电泳只有一条目的条带，怎么回事已经有5人回复
荧光定量PCR ，条件优化已经有13人回复
小白问荧光定量pcr相关问题已经有2人回复
半定量荧光PCR内参长度与特异性引物之间片段长度关系已经有1人回复
敢问众位大侠每个生物的GAPDH序列都是一样的吗？已经有8人回复
【求助/交流】问个有关荧光定量的棘手问题，来了好几个技术支持都找不出原因。已经有0人回复
问个有关荧光定量的棘手问题，来了好几个技术支持都找不出原因。已经有0人回复
【分享】realtime pcr 个人经验分享已经有41人回复

1楼 2016-06-20 22:24:51

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

atlanticwi

金虫 (正式写手)

琴美喜欢发呆不喜欢发脾气

MolEPI: 25
应助: 138 (高中生)
金币: 141.2
散金: 350
红花: 13
帖子: 536
在线: 313.2小时
虫号: 1099992
注册: 2010-09-15
专业: 植物生理与生化

★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰·手有余香，谢谢你的理解与支持。祝您科研顺利，文章多多。 2016-06-21 00:00:47

1) 至今不太清楚Melt Curve里Tm值和特异性的关系，但据我观察，qRT-PCR引物一般都会设计在60度以上以保证特异性，同时有些PCR程序直接以两步发进行，这些引物扩增的产物经过melt curve后基本峰值都会70左右及以上。这可能也与扩增长度有关，总之一般单峰，且峰形呈现"Sharp“特性，就可以了(除非全是引物二聚体，一般这种非特异产物的Tm在melt curve里均会在50~60左右，且峰值不够“Sharp”，比较好判别)
2) 跑一下胶，看看条带大小也能断定。

赞一下

回复此楼

Let God do with it as He wills

2楼2016-06-20 23:43:29

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

hanxiaominhu

至尊木虫 (著名写手)

应助: 126 (高中生)
金币: 25793.4
散金: 127
红花: 14
帖子: 2978
在线: 846.8小时
虫号: 1526260
注册: 2011-12-06
性别: GG
专业: 生物化学

★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖

你这是引物的溶解曲线吗？就我所知道的荧光定量PCR中引物的好坏是要检测产物的溶解曲线吧，这样才能衡量引物在你PCR体系里扩增的特异性。而且最好是看你所有的孔中的溶解曲线Tm值是否一致，如果有的孔好，有的孔不好，也是不能用的。
如果这是产物的溶解曲线，我一般做的正常的有变性、退火、延伸的程序（楼上说的两部发我不清楚）要求产物大小在100以上的话，似乎没有见过你这么低的Tm值，一般都是80多度。

赞一下(2人)

回复此楼

3楼2016-06-21 09:28:59

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖