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实时荧光定量pcr的一些问题
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本人最近刚做荧光定量pcr。每次都能跑出结果，重复孔标准差一般小于0.3。但是不同时间做的趋势不一样，有的物质有时候增强基因表达，有的抑制基因表达。有时甚至连同一批次的cdna也是如此。我的体系是20ul的，模板稀释40倍，每体系加4ul，内参16~17之间。难道是引物的扩增效率问题？做之前问过一些人，有的说做标准曲线，有的说不用做。因为用的是双deta t的方法，觉得做标准曲线好麻烦，就懒了下。。。下面上引物的溶解曲线图。求大神帮忙， 20140425 ERA(2UM).jpg  20140428 AHR 5UM(4.24MODEL).jpg  20140428 BAX(4.24MODEL).jpg  20140428 BCL-2 5UM(4.24MODEL).jpg  20140428 E-CA(5UM) (4.24MODEL).jpg  20140428 ERA(4.24MODEL).jpg  20140428 GADPH 5UM(4.24MODEL).jpg |
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