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荧光定量PCR引物问题 已有7人参与
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这是某个基因引物的溶解曲线图，从图看，引物能用么？ IMG_20160608_190839.jpg |
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棍子168
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8楼2016-06-23 22:36:13
atlanticwi
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1) 至今不太清楚Melt Curve里Tm值和特异性的关系，但据我观察，qRT-PCR引物一般都会设计在60度以上以保证特异性，同时有些PCR程序直接以两步发进行，这些引物扩增的产物经过melt curve后基本峰值都会70左右及以上。这可能也与扩增长度有关，总之一般单峰，且峰形呈现"Sharp“特性，就可以了(除非全是引物二聚体，一般这种非特异产物的Tm在melt curve里均会在50~60左右，且峰值不够“Sharp”，比较好判别) 2) 跑一下胶，看看条带大小也能断定。 |
2楼2016-06-20 23:43:29
hanxiaominhu
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3楼2016-06-21 09:28:59
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4楼2016-06-21 23:00:53
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