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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » PCR产物是引物二聚体
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lycpu

金虫 (小有名气)
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PCR产物是引物二聚体
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20ul体系，模板DNA 1ul, dNTP 2ul，buffer 2ul, Ex-Taq酶0.2ul,上下游引物都是0.5ul, dd水14ul.
PCR的反应条件是：预变性 94℃ 5min, 变性94℃ 30s, 退火 68℃ 45s, 64℃45s延伸 72℃ 45s, 延伸72℃ 10min, 30个循环。做了两组，退火温度做了两个一个68℃，一个64℃.两个引物都是2000多bp.一直都扩不出来，求助各位虫友分析分析。Marker是DL5000的。

PCR产物是引物二聚体


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1楼 2016-05-28 22:30:10
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5150416

新虫 (小有名气)
★ ★
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myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰·手有余香，谢谢你的理解与支持。myprayer祝您科研顺利，文章多多。 2016-06-01 22:16:05
可能你的引物设计的有问题，要不就把退火温度降低一点

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22楼2016-05-28 22:41:24
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lycpu

金虫 (小有名气)
引用回帖:
22楼: Originally posted by 5150416 at 2016-05-28 22:41:24
可能你的引物设计的有问题，要不就把退火温度降低一点

可能吧！

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23楼2016-05-28 22:50:56
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siyuansing

银虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
两个引物都是2000多bp

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24楼2016-05-29 00:17:55
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原海亮

木虫 (著名写手)
★ ★
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myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰·手有余香，谢谢你的理解与支持。myprayer祝您科研顺利，文章多多。 2016-06-01 22:16:16
你的模板是什么额？引物有问题也应该有些非特异性条带额，是不是模板出现什么问题了

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25楼2016-06-01 22:12:17
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匿名

木虫 (小有名气)
★
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26楼2016-06-01 22:36:25
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super_mm

木虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引物特异性不强或者退火温度不合适，可以多试几个Tm，梯度拉大一些
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27楼2016-06-02 15:15:18
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安静de执着14

新虫 (著名写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
退火温度有点高，适当降低一下，你确定你的模板没问题吗？感觉你模板出问题的可能性比较大。

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28楼2016-06-02 23:49:52
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zfy535251

新虫 (小有名气)
★
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你的模板还好吗？有种降解的感觉

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29楼2016-06-03 10:16:45
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lycpu

金虫 (小有名气)
引用回帖:
29楼: Originally posted by zfy535251 at 2016-06-03 10:16:45
你的模板还好吗？有种降解的感觉

模板没有问题，检测过了

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30楼2016-06-03 11:03:35
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yaohuaibing

铁杆木虫 (著名写手)
★
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母的片段太长 不好P 建议分段P
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31楼2016-06-09 23:18:00
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wywei2012

新虫 (初入文坛)
★
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应该是退火温度问题，循环条件中，延伸时间延长下

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32楼2016-06-10 10:55:42
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風之叶落

金虫 (初入文坛)
★
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退火温度，可以做一个温度梯度。或者做PCR的时候加一微甘油（20微体系）试试
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33楼2016-06-17 18:27:26
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选择远方523

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
你的目的条带多大

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34楼2016-06-17 21:49:49
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选择远方523

新虫 (初入文坛)
你延伸的时间感觉太短了。至少要两分钟的

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35楼2016-06-17 21:51:13
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15694412860

新虫 (初入文坛)
★
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请问楼主怎么解决的，我要遇到了一样的问题

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36楼2017-05-12 16:40:03
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dellxiong

金虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引物多长？
退火温度是不是太高了，81.4+0.41*GC%-600/(引物长度bp)，估一下大概的温度。
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37楼2017-05-12 17:14:53
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小乌龟金牛2楼
2016-05-28 22:30   回复  
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Yuanfang_8183楼
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jpf1174楼
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leehong8165楼
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adrian26楼
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xmczzw7楼
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空气中的绿色8楼
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ychem9楼
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mq3368_cn10楼
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李庆鑫11楼
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广昂12楼
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ywj363613楼
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豆浆娜娜14楼
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琳逸喏15楼
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haiyanma16楼
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wangchunting17楼
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www16856818楼
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wucuixia19楼
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牧童游子20楼
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nick y21楼
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