24小时热门版块排行榜    

查看: 1929  |  回复: 12

养鸡专业户

新虫 (初入文坛)

[求助] His标签蛋白纯化的问题 已有4人参与

我的目的蛋白在40多,用的是pet-32a载体,诱导时间一般在五个小时左右。上清和包涵体都有表达,但是上清纯化出来多一个条带,而且蛋白并不纯,包涵体纯化多出来的那个条带不是那么明显。

His标签蛋白纯化的问题


His标签蛋白纯化的问题-1


发自小木虫IOS客户端
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

miega

银虫 (小有名气)

楼主的图跑的太好了,请问用多少菌液点样量是多少?

发自小木虫Android客户端
10楼2016-05-27 01:06:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

养鸡专业户

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
5楼: Originally posted by hc-material at 2016-05-18 16:53:02
看电泳图,是可溶性表达啊,然后破碎是否彻底。
纯化出来不纯有各种原因:
1.柱子没平衡好。增加平衡的时间。
2.柱填料有问题换新的。
3.洗脱拉咪唑梯度太大,可以拉梯度更细一些。
4.非特异性吸附多,平衡缓冲 ...

我用的碧云天的纯化试剂盒。请问下那个较小的带是不是标签掉了还是什么别的原因么?

发自小木虫IOS客户端
8楼2016-05-21 20:50:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

030Selma

金虫 (正式写手)

可溶蛋白非特异吸附,所以上清中多一些,包涵体少一些

发自小木虫IOS客户端
2楼2016-05-17 11:48:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

弘伟

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
也许把第一次纯化出来的蛋白再过一次柱子,纯度会好一些,第二条比较亮的带有没有可能是由于这个蛋白有降解呀。
3楼2016-05-17 12:25:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

周军威66

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
我跟你的目的蛋白差不多,能挂上柱但是洗不下来,换了不同浓度的咪唑缓冲液还是不行。我的目的蛋白与上两届的师姐属于同一家族,她的就可以,我的就是不行,不知道为什么,求助!!!!!!!
研究生,游泳,羽球。
4楼2016-05-17 17:01:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hc-material

专家顾问 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
看电泳图,是可溶性表达啊,然后破碎是否彻底。
纯化出来不纯有各种原因:
1.柱子没平衡好。增加平衡的时间。
2.柱填料有问题换新的。
3.洗脱拉咪唑梯度太大,可以拉梯度更细一些。
4.非特异性吸附多,平衡缓冲液中加20mM的咪唑和400mM的氯化钠减少非特异性吸附。
祝顺利
5楼2016-05-18 16:53:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

harry007

新虫 (小有名气)

6楼2016-05-20 06:17:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

养鸡专业户

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 弘伟 at 2016-05-17 12:25:45
也许把第一次纯化出来的蛋白再过一次柱子,纯度会好一些,第二条比较亮的带有没有可能是由于这个蛋白有降解呀。

也怀疑过是降解,后来加了蛋白酶抑制剂还是没有好转

发自小木虫IOS客户端
7楼2016-05-21 20:48:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lxf64210785

铜虫 (小有名气)

不知道有没有试过减少挂住时间,加快洗脱速度

发自小木虫Android客户端
9楼2016-05-21 22:07:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 养鸡专业户 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 一志愿北京化工大学材料与化工(085600)296求调剂 +3 稻妻小编 2026-03-26 3/150 2026-03-26 09:08 by mmm just
[考研] 0856求调剂 +6 zhn03 2026-03-25 7/350 2026-03-26 08:51 by zhyzzh
[考研] 08工学调剂 +13 用户573181 2026-03-20 18/900 2026-03-25 22:00 by zbssa
[考研] 299求调剂 +7 某某某某位 2026-03-21 8/400 2026-03-25 20:34 by 热情沙漠
[考研] 0854人工智能方向招收调剂 +4 章小鱼567 2026-03-24 4/200 2026-03-25 13:29 by 2177681040
[考研] 一志愿 西北大学 ,070300化学学硕,总分287,双非一本,求调剂。 +4 晨昏线与星海 2026-03-20 4/200 2026-03-25 10:16 by allen-yin
[考研] 生物学学硕求调剂 +7 小羊睡着了? 2026-03-23 10/500 2026-03-25 02:24 by 清风拂扬。 m
[考研] 材料学求调剂 +6 Stella_Yao 2026-03-20 6/300 2026-03-25 00:37 by baoball
[考研] 材料考研调剂生 +3 黄粱一梦千年 2026-03-24 3/150 2026-03-24 17:00 by barlinike
[考研] 求调剂一志愿武汉理工大学材料工程(085601) +5 WW.' 2026-03-23 7/350 2026-03-24 14:50 by sprinining
[考研] 一志愿河北工业大学0817化工278分求调剂 +7 jhybd 2026-03-23 12/600 2026-03-24 09:03 by jhybd
[考研] 接收2026硕士调剂(学硕+专硕) +4 allen-yin 2026-03-23 6/300 2026-03-23 15:04 by 汪!?!
[考研] 298求调剂 +8 上岸6666@ 2026-03-20 8/400 2026-03-23 11:02 by laoshidan
[考研] 298求调剂一志愿211 +3 上岸6666@ 2026-03-20 3/150 2026-03-22 15:50 by ColorlessPI
[考研] 求调剂院校信息 +6 CX 330 2026-03-21 6/300 2026-03-22 15:25 by 无懈可击111
[考研] 一志愿北京化工大学070300 学硕336求调剂 +5 vv迷 2026-03-21 8/400 2026-03-22 14:20 by ColorlessPI
[考研] 085600材料与化工306 +4 z1z2z3879 2026-03-21 4/200 2026-03-21 23:44 by ms629
[考研] 一志愿东华大学控制学硕320求调剂 +3 Grand777 2026-03-21 3/150 2026-03-21 19:23 by 简之-
[考研] 086500 325 求调剂 +3 领带小熊 2026-03-19 3/150 2026-03-20 18:38 by 尽舜尧1
[考研] 0856调剂,是学校就去 +8 sllhht 2026-03-19 9/450 2026-03-20 14:25 by 无懈可击111
信息提示
请填处理意见