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zhiqiang5070

木虫 (正式写手)

[求助] 求助啊,急~蛋白纯化,制备多抗问题

纯化蛋白中、、、利用HIS标签过镍柱纯化,蛋白于包涵体中。问题是每次纯化后都有一条杂带跟着,通过PBS清洗几次,把洗涤液的pH调整等,还是不能把杂蛋白去掉。PS:我的纯化方法来自于novagen说明书,通过
  (Buffer B: 8 M urea, 0.1 M sodium phosphate buffer, 0.01 M Tris-Cl, pH 8.0
     Denaturing wash buffer
     Buffer C: 8 M urea, 0.1 M sodium phosphate buffer, 0.01 M Tris-Cl pH 6.3
     Denaturing elution buffers
     Buffer D: 8 M urea, 0.1 M sodium phosphate buffer, 0.01 M Tris-Cl pH 5.9
     Buffer E: 8 M urea, 0.1 M sodium phosphate buffer, 0.01 M Tris-Cl pH 4.5 )不同pH的Buffer洗。

     我后面可能要做WB或Elisa,想知道就这样做多克隆抗体对后续实验会有什么影响,能不能就这样送去做多抗?
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无善无恶心之体
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yylc1840

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
zhiqiang5070: 金币+1, 有帮助 2012-04-22 20:43:15
可以用咪唑洗脱啊,pH洗脱方法没有咪唑的好,你可以用咪唑洗杂蛋白,看看行不行
2楼2012-04-16 12:46:54
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swlsangon

木虫 (小有名气)

快乐的木虫

这样做多抗没有问题。
生命在于运动
3楼2015-03-17 12:23:27
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