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zhiqiang5070木虫 (正式写手)
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[求助]
求助啊，急~蛋白纯化，制备多抗问题
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纯化蛋白中、、、利用HIS标签过镍柱纯化，蛋白于包涵体中。问题是每次纯化后都有一条杂带跟着，通过PBS清洗几次，把洗涤液的pH调整等，还是不能把杂蛋白去掉。PS：我的纯化方法来自于novagen说明书，通过 （Buffer B: 8 M urea, 0.1 M sodium phosphate buffer, 0.01 M Tris-Cl, pH 8.0 Denaturing wash buffer Buffer C: 8 M urea, 0.1 M sodium phosphate buffer, 0.01 M Tris-Cl pH 6.3 Denaturing elution buffers Buffer D: 8 M urea, 0.1 M sodium phosphate buffer, 0.01 M Tris-Cl pH 5.9 Buffer E: 8 M urea, 0.1 M sodium phosphate buffer, 0.01 M Tris-Cl pH 4.5 ）不同pH的Buffer洗。 我后面可能要做WB或Elisa，想知道就这样做多克隆抗体对后续实验会有什么影响，能不能就这样送去做多抗？  |
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2楼2012-04-16 12:46:54
swlsangon
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快乐的木虫
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