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【求助/交流】求助兔子多抗的制备详细的实验器材和实验步骤!
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| 求助兔子多抗的制备详细的实验器材和实验步骤! |
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2楼2011-02-22 09:08:50
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dhd997(金币+6): 热心 2011-02-22 09:44:16
韩锋红岩(金币+2): 2011-02-22 11:23:18
dhd997(金币+6): 热心 2011-02-22 09:44:16
韩锋红岩(金币+2): 2011-02-22 11:23:18
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其实很多地方都有的,以下是我实习时用的教案,希望有所帮助。 实验一 免疫血清的制备 一、实验目的 熟悉免疫血清的制备过程; 了解动物实验的基本知识。 二、实验原理 将抗原物质经适当途径,按照预先制定的免疫方案免疫动物,经过一定时间,可刺激机体产生特异抗体并释放入血液,当血中抗体达到一定效价时采血,分离血清,即为特异性免疫血清(又称为抗血清)。因抗原具有多种表位,可激活多个克隆的B细胞活化产生抗体,因此,这种免疫血清又称为多克隆抗体。 本实验以绵羊红细胞(SRBC)作为免疫原,以家兔为免疫动物,制备兔抗养红细胞免疫血清(也称为溶血素) 三、器材和材料 1.动物 健康成年家兔,雄性,体重2-3kg;健康成年绵羊。 2.试剂 生理盐水、碘酒、75%酒精。 3.器材 剪刀、镊子、无菌注射器、量筒、无菌毛细滴管、无菌试管、离心管、三角烧瓶(200ml)、动物固定架、手术器械一套、塑料放血管等。 四、 实验步骤 1.抗原制备 (1)用碘酒和75% 消毒绵羊皮肤,抽取颈静脉血液,注入含有等量阿氏液的三角烧瓶内,混匀。阿氏液既有抗凝作用,又适于储存SRBC。分装后置4℃冰箱内,可使用3周。 (2)无菌取上述绵羊血于离心管中,用无菌生理盐水洗涤红细胞,2000r/min,离心5min,吸弃上清液和白细胞层,再用无菌生理盐水与SRBC混匀, 2000r/min,离心5min,重复3次。最后一次离心10min,以使血细胞沉积于管底,弃去上清液。 (3)根据红细胞积压,用生理盐水配成20%SRBC悬液。 2.免疫动物 (1)全班分为4组,每组选择健康雄性兔1只,用于免疫。 (2)用全血和SRBC悬液按下述方案免疫兔子。 (3)试血 末次注射后第7天,耳静脉采血1ml ,分离血清,用试管凝集试验滴定效价。(1:2000以上可用) 3、分离血清 (1) 颈动脉放血(心脏采血)并收集于无菌三角烧瓶中凝固后4℃冰箱过夜,分离上层血清。然后2500r/min离心10min,收集收集上层血清。 (2)收集的血清经鉴定纯化后,小量分装,-20℃冻存。 五、实验结果 收获的血清应无菌,且无溶血现象。兔抗SRBC免疫血清的溶血效价应高于1:2000;兔抗人IgG免疫血清的效价应高于1:16。 六、 注意事项 抗原制备、免疫动物及采集血清等过程应注意菌操作; 免疫的途径、次数、间隔时间因抗原性状不同而异,应合理设计免疫方案,并更具具体情况加以调整; 再次注射免疫原时,要防治过敏反应发生。 |
3楼2011-02-22 09:19:41
4楼2011-02-22 11:49:39
5楼2013-07-26 13:39:09
6楼2013-12-13 09:58:30
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