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韩锋红岩

银虫 (小有名气)

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[交流] 【求助/交流】求助兔子多抗的制备详细的实验器材和实验步骤！

求助兔子多抗的制备详细的实验器材和实验步骤！

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1楼 2011-02-21 15:48:32

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小笨蛋次次

银虫 (小有名气)

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dhd997(金币+6): 热心 2011-02-22 09:44:16
韩锋红岩(金币+2): 2011-02-22 11:23:18

引用回帖:

Originally posted by 韩锋红岩 at 2011-02-21 07:48:32:
求助兔子多抗的制备详细的实验器材和实验步骤！

其实很多地方都有的，以下是我实习时用的教案，希望有所帮助。
实验一  免疫血清的制备
一、实验目的
熟悉免疫血清的制备过程；
了解动物实验的基本知识。
二、实验原理
将抗原物质经适当途径，按照预先制定的免疫方案免疫动物，经过一定时间，可刺激机体产生特异抗体并释放入血液，当血中抗体达到一定效价时采血，分离血清，即为特异性免疫血清（又称为抗血清）。因抗原具有多种表位，可激活多个克隆的B细胞活化产生抗体，因此，这种免疫血清又称为多克隆抗体。
本实验以绵羊红细胞（SRBC）作为免疫原，以家兔为免疫动物，制备兔抗养红细胞免疫血清（也称为溶血素）
三、器材和材料
1.动物  健康成年家兔，雄性，体重2-3kg；健康成年绵羊。
2.试剂  生理盐水、碘酒、75%酒精。
3.器材  剪刀、镊子、无菌注射器、量筒、无菌毛细滴管、无菌试管、离心管、三角烧瓶（200ml）、动物固定架、手术器械一套、塑料放血管等。
四、实验步骤
1.抗原制备
（1）用碘酒和75% 消毒绵羊皮肤，抽取颈静脉血液，注入含有等量阿氏液的三角烧瓶内，混匀。阿氏液既有抗凝作用，又适于储存SRBC。分装后置4℃冰箱内，可使用3周。
（2）无菌取上述绵羊血于离心管中，用无菌生理盐水洗涤红细胞，2000r/min，离心5min，吸弃上清液和白细胞层，再用无菌生理盐水与SRBC混匀， 2000r/min，离心5min，重复3次。最后一次离心10min，以使血细胞沉积于管底，弃去上清液。（3）根据红细胞积压，用生理盐水配成20%SRBC悬液。
2.免疫动物
（1）全班分为4组，每组选择健康雄性兔1只，用于免疫。
（2）用全血和SRBC悬液按下述方案免疫兔子。

（3）试血
末次注射后第7天，耳静脉采血1ml ,分离血清，用试管凝集试验滴定效价。（1：2000以上可用）
3、分离血清
（1）  颈动脉放血（心脏采血）并收集于无菌三角烧瓶中凝固后4℃冰箱过夜，分离上层血清。然后2500r/min离心10min，收集收集上层血清。
（2）收集的血清经鉴定纯化后，小量分装，-20℃冻存。
五、实验结果
  收获的血清应无菌，且无溶血现象。兔抗SRBC免疫血清的溶血效价应高于1：2000；兔抗人IgG免疫血清的效价应高于1：16。
六、注意事项
抗原制备、免疫动物及采集血清等过程应注意菌操作；
免疫的途径、次数、间隔时间因抗原性状不同而异，应合理设计免疫方案，并更具具体情况加以调整；
再次注射免疫原时，要防治过敏反应发生。