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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 求助啊，急~蛋白纯化，制备多抗问题
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zhiqiang5070

木虫 (正式写手)

[求助] 求助啊，急~蛋白纯化，制备多抗问题

纯化蛋白中、、、利用HIS标签过镍柱纯化，蛋白于包涵体中。问题是每次纯化后都有一条杂带跟着，通过PBS清洗几次，把洗涤液的pH调整等，还是不能把杂蛋白去掉。PS：我的纯化方法来自于novagen说明书，通过
  （Buffer B: 8 M urea, 0.1 M sodium phosphate buffer, 0.01 M Tris-Cl, pH 8.0
     Denaturing wash buffer
     Buffer C: 8 M urea, 0.1 M sodium phosphate buffer, 0.01 M Tris-Cl pH 6.3
     Denaturing elution buffers
     Buffer D: 8 M urea, 0.1 M sodium phosphate buffer, 0.01 M Tris-Cl pH 5.9
     Buffer E: 8 M urea, 0.1 M sodium phosphate buffer, 0.01 M Tris-Cl pH 4.5 ）不同pH的Buffer洗。

     我后面可能要做WB或Elisa，想知道就这样做多克隆抗体对后续实验会有什么影响，能不能就这样送去做多抗？
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无善无恶心之体
1楼 2012-03-27 10:01:07
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yylc1840

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
zhiqiang5070: 金币+1, ★有帮助 2012-04-22 20:43:15
可以用咪唑洗脱啊，pH洗脱方法没有咪唑的好，你可以用咪唑洗杂蛋白，看看行不行
赞一下 回复此楼
2楼2012-04-16 12:46:54
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swlsangon

木虫 (小有名气)

快乐的木虫
这样做多抗没有问题。
赞一下 回复此楼
生命在于运动
3楼2015-03-17 12:23:27
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