24小时热门版块排行榜    

查看: 2275  |  回复: 12
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

养鸡专业户

新虫 (初入文坛)

[求助] His标签蛋白纯化的问题 已有4人参与

我的目的蛋白在40多,用的是pet-32a载体,诱导时间一般在五个小时左右。上清和包涵体都有表达,但是上清纯化出来多一个条带,而且蛋白并不纯,包涵体纯化多出来的那个条带不是那么明显。

His标签蛋白纯化的问题


His标签蛋白纯化的问题-1


发自小木虫IOS客户端
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

养鸡专业户

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
5楼: Originally posted by hc-material at 2016-05-18 16:53:02
看电泳图,是可溶性表达啊,然后破碎是否彻底。
纯化出来不纯有各种原因:
1.柱子没平衡好。增加平衡的时间。
2.柱填料有问题换新的。
3.洗脱拉咪唑梯度太大,可以拉梯度更细一些。
4.非特异性吸附多,平衡缓冲 ...

我用的碧云天的纯化试剂盒。请问下那个较小的带是不是标签掉了还是什么别的原因么?

发自小木虫IOS客户端
8楼2016-05-21 20:50:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 13 个回答

030Selma

金虫 (正式写手)

可溶蛋白非特异吸附,所以上清中多一些,包涵体少一些

发自小木虫IOS客户端
2楼2016-05-17 11:48:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

弘伟

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
也许把第一次纯化出来的蛋白再过一次柱子,纯度会好一些,第二条比较亮的带有没有可能是由于这个蛋白有降解呀。
3楼2016-05-17 12:25:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

周军威66

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
我跟你的目的蛋白差不多,能挂上柱但是洗不下来,换了不同浓度的咪唑缓冲液还是不行。我的目的蛋白与上两届的师姐属于同一家族,她的就可以,我的就是不行,不知道为什么,求助!!!!!!!
研究生,游泳,羽球。
4楼2016-05-17 17:01:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考博] 售SCI一区T0P文章,我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 FChKX8meu1ds 2026-11-09 5/250 2026-11-11 04:40 by Z7qfCsdIiD1T
[教师之家] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +3 FChKX8meu1ds 2026-11-09 6/300 2026-11-11 04:32 by Z7qfCsdIiD1T
[论文投稿] 售SCI一区文章,我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +3 FChKX8meu1ds 2026-11-09 5/250 2026-11-11 04:23 by Z7qfCsdIiD1T
[论文投稿] 售SCI一区T0P文章,我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +4 cqv1zKnzd7hr 2026-11-09 7/350 2026-11-11 04:21 by Z7qfCsdIiD1T
[论文投稿] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +3 0TEMgxdT1eIw 2026-11-09 6/300 2026-11-11 04:10 by Z7qfCsdIiD1T
[硕博家园] 售SCI文章,我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +4 0TEMgxdT1eIw 2026-11-09 6/300 2026-11-11 04:07 by Z7qfCsdIiD1T
[公派出国] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +4 FChKX8meu1ds 2026-11-09 6/300 2026-11-11 01:54 by Z7qfCsdIiD1T
[教师之家] 售SCI一区T0P文章,我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 FChKX8meu1ds 2026-11-09 6/300 2026-11-11 01:32 by Z7qfCsdIiD1T
[考研] 售SCI一区T0P文章,我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 cqv1zKnzd7hr 2026-11-09 5/250 2026-11-11 01:24 by Z7qfCsdIiD1T
[考研] 售SCI文章,我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +4 0TEMgxdT1eIw 2026-11-09 6/300 2026-11-11 01:10 by Z7qfCsdIiD1T
[教师之家] 售SCI一区T0P文章,我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +4 zSbvVX9JFl9J 2026-11-09 6/300 2026-11-11 01:02 by Z7qfCsdIiD1T
[考博] 售SCI一区文章,我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 zSbvVX9JFl9J 2026-11-09 4/200 2026-11-10 01:29 by FChKX8meu1ds
[文学芳草园] 厉娜 +3 张丹枫1991 2026-11-09 5/250 2026-11-09 16:53 by 张丹枫1991
[考博] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +5 kvewwGtKktqB 2026-11-04 12/600 2026-11-09 13:26 by Equinoxhua
[考博] 售SCI文章,我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +5 5sJFDKp2kwuI 2026-11-06 15/750 2026-11-09 11:41 by GwrQVVR6Oenx
[公派出国] 售SCI一区文章,我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +4 5sJFDKp2kwuI 2026-11-06 8/400 2026-11-09 00:14 by l48hFd8Nwae2
[公派出国] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +5 ttH3f1oA6ace 2026-11-04 10/500 2026-11-06 16:12 by 5sJFDKp2kwuI
[硕博家园] 售SCI一区文章,我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +4 ttH3f1oA6ace 2026-11-04 11/550 2026-11-06 16:10 by 5sJFDKp2kwuI
[公派出国] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +5 kvewwGtKktqB 2026-11-04 14/700 2026-11-06 05:10 by qL1cU46YIdK0
[硕博家园] 售SCI-T0P文章,我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 ttH3f1oA6ace 2026-11-04 9/450 2026-11-06 02:02 by qL1cU46YIdK0
信息提示
请填处理意见