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His-Tag纯化遇到的问题 已有3人参与
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最近开始做蛋白的纯化，希望能拿到高纯度的酶，蛋白是可溶性表达，所以直接拿上清液做的Ni柱纯化，可是发现不挂住，标签是在N端，推测是His标签被包裹了，所以用8M尿素溶解，变成线性之后又做了纯化，发现可以纯化出来了，验证了我的推测。但是我要的是可溶性表达，我该怎么解决His标签被包含的问题呢？不能做复性，我要的量比较大，需要可溶性表达。 我查资料发现可以加自己设计加His的长度，如果有谁知道方法的话交流一下。我的质粒C端没有His标签，如果要加只能手动加，但是不知道怎么设计引物，因为在酶切位点之后了~ |
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