应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 蛋白/酶 » His标签蛋白纯化的问题
131/2返回列表12下一页
查看: 2106  |  回复: 12
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

养鸡专业户

新虫 (初入文坛)

[求助] His标签蛋白纯化的问题 已有4人参与

我的目的蛋白在40多，用的是pet-32a载体，诱导时间一般在五个小时左右。上清和包涵体都有表达，但是上清纯化出来多一个条带，而且蛋白并不纯，包涵体纯化多出来的那个条带不是那么明显。

His标签蛋白纯化的问题


His标签蛋白纯化的问题-1


发自小木虫IOS客户端
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2016-05-17 11:16:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

miega

银虫 (小有名气)
楼主的图跑的太好了，请问用多少菌液点样量是多少？

发自小木虫Android客户端
赞一下(3人) 回复此楼
10楼2016-05-27 01:06:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

养鸡专业户

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by hc-material at 2016-05-18 16:53:02
看电泳图，是可溶性表达啊，然后破碎是否彻底。
纯化出来不纯有各种原因：
1.柱子没平衡好。增加平衡的时间。
2.柱填料有问题换新的。
3.洗脱拉咪唑梯度太大，可以拉梯度更细一些。
4.非特异性吸附多，平衡缓冲 ...

我用的碧云天的纯化试剂盒。请问下那个较小的带是不是标签掉了还是什么别的原因么？

发自小木虫IOS客户端
赞一下(1人) 回复此楼
8楼2016-05-21 20:50:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

030Selma

金虫 (正式写手)
可溶蛋白非特异吸附，所以上清中多一些，包涵体少一些

发自小木虫IOS客户端
赞一下 回复此楼
2楼2016-05-17 11:48:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

弘伟

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
也许把第一次纯化出来的蛋白再过一次柱子，纯度会好一些，第二条比较亮的带有没有可能是由于这个蛋白有降解呀。
赞一下 回复此楼
3楼2016-05-17 12:25:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

周军威66

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
我跟你的目的蛋白差不多，能挂上柱但是洗不下来，换了不同浓度的咪唑缓冲液还是不行。我的目的蛋白与上两届的师姐属于同一家族，她的就可以，我的就是不行，不知道为什么，求助！！！！！！！
赞一下 回复此楼
研究生，游泳，羽球。
4楼2016-05-17 17:01:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hc-material

专家顾问 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
看电泳图，是可溶性表达啊，然后破碎是否彻底。
纯化出来不纯有各种原因：
1.柱子没平衡好。增加平衡的时间。
2.柱填料有问题换新的。
3.洗脱拉咪唑梯度太大，可以拉梯度更细一些。
4.非特异性吸附多，平衡缓冲液中加20mM的咪唑和400mM的氯化钠减少非特异性吸附。
祝顺利
赞一下 回复此楼
5楼2016-05-18 16:53:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

harry007

新虫 (小有名气)
二聚体？

发自小木虫IOS客户端
回复此楼
6楼2016-05-20 06:17:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

养鸡专业户

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 弘伟 at 2016-05-17 12:25:45
也许把第一次纯化出来的蛋白再过一次柱子，纯度会好一些，第二条比较亮的带有没有可能是由于这个蛋白有降解呀。

也怀疑过是降解，后来加了蛋白酶抑制剂还是没有好转

发自小木虫IOS客户端
赞一下 回复此楼
7楼2016-05-21 20:48:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lxf64210785

铜虫 (小有名气)
不知道有没有试过减少挂住时间，加快洗脱速度

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
9楼2016-05-21 22:07:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 养鸡专业户 的主题更新
131/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 2019年青年基金涵评意见，大家看看几个A，几个B? +4 Tide man 2026-08-11 4/200 2026-08-12 00:39 by liuqidi
[基金申请] 应该是93bebmhtak前后十一个字符比较关键 +17 Lanmanbaby 2026-08-09 29/1450 2026-08-12 00:24 by zhanghaozhu
[基金申请] 奇怪，两个人的filecode固定段从头到尾一模一样 +7 布布和一二 2026-08-10 9/450 2026-08-11 22:12 by 医学老男孩
[基金申请] 有时候，自然基金真的不能太认真 （我的申报经验） +3 majunge000 2026-08-11 4/200 2026-08-11 20:13 by lch2012
[基金申请] 帮忙看看fileCode +7 wwncly 2026-08-10 13/650 2026-08-11 19:36 by 冰心玉壶晴
[硕博家园] 读博的好处 +3 lnee 2026-08-11 3/150 2026-08-11 18:10 by 希望我好好的
[论文投稿] 职称评审，求友友推荐见刊最快的期刊 +3 工厂打螺丝 2026-08-08 3/150 2026-08-11 13:42 by 会议编辑
[基金申请] 听说今天filecode变了 +26 布布和一二 2026-08-06 49/2450 2026-08-11 13:18 by WH3796
[基金申请] FileCode能看出啥？ +7 要乐观耀哥 2026-08-10 17/850 2026-08-11 10:50 by 要乐观耀哥
[基金申请] 确定了，国自然21号放榜 +6 布布和一二 2026-08-10 7/350 2026-08-10 19:15 by 2000zf36392
[基金申请] 2026国自然放榜时间 +9 布布和一二 2026-08-08 9/450 2026-08-10 11:22 by xxxx2020
[基金申请] 这样的filecode谁见过 +11 布布和一二 2026-08-08 22/1100 2026-08-10 11:10 by wmfsnow
[基金申请] filecode与中标关系的预测 +5 布布和一二 2026-08-07 5/250 2026-08-09 16:15 by 袁向阳007
[基金申请] 关于filecode +4 布布和一二 2026-08-07 7/350 2026-08-07 22:55 by zhanghaozhu
[基金申请] 化学口download_prp&fileCode的固定段好像这几天一直没变，有变的大神么？ +3 Tide man 2026-08-07 4/200 2026-08-07 22:39 by Tide man
[基金申请] 固定端突然变了，今天 +6 archvillain 2026-08-06 10/500 2026-08-07 16:03 by 医学老男孩
[基金申请] 大家散了吧，后缀研究没有意义，别浪费时间了，过好目前的每一天，不要焦虑 +5 Tide man 2026-08-06 7/350 2026-08-07 13:11 by 医学老男孩
[基金申请] filecode +14 等待解的谜 2026-08-06 19/950 2026-08-07 12:20 by wlwhappy
[基金申请] 影响面上的因素 +8 布布和一二 2026-08-05 11/550 2026-08-06 10:41 by 宝贝虫子
[基金申请] 好消息？这个有何含义？？？ +8 Tide man 2026-08-05 10/500 2026-08-05 16:14 by xmuxiaoyu
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭