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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 生物化学 » 蛋白诱导不明显
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顺利一生

新虫 (初入文坛)

[求助] 蛋白诱导不明显 已有2人参与

大神们   请问 为什么我构建目的基因到pet32a上，一直诱导不是很明显，试过许多条件   IPTG，温度，时间 。转到bl21和rosetta中  都没用。  我的目的基因444bp，构建到pet32a上差不多34kd左右吧，其他人构建其他的基因也有条30多kd的带，我想问是不是pet32a控质粒就是34kd左右呢？？    我怎样才可以诱导明显呢？？//
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1楼 2016-05-07 15:42:47
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顺利一生

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by wlt728 at 2016-05-08 10:56:40
是的，构建好了还要测序的，完了再诱导，你可以做个WB看看。有的时候，也可能是载体或者宿主菌不太合适！

WB  不得有抗体才可以检测吗    可是我没有抗体哦   我还得重新构建到flag标签上，感觉挺麻烦的
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5楼2016-05-08 13:55:29
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stone2239

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
是不明显还是没有？你确定诱导出了吗？载体构建好后测序了吗？会不会构建有误。
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2楼2016-05-07 22:42:33
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wlt728

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
是的，构建好了还要测序的，完了再诱导，你可以做个WB看看。有的时候，也可能是载体或者宿主菌不太合适！
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I am not a hero , but I served with heroes！
3楼2016-05-08 10:56:40
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顺利一生

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by stone2239 at 2016-05-07 22:42:33
是不明显还是没有？你确定诱导出了吗？载体构建好后测序了吗？会不会构建有误。

不明显，测序正确  我看了   没有问题
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4楼2016-05-08 13:53:24
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