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顺利一生

新虫 (初入文坛)

[求助] 蛋白诱导不明显 已有2人参与

大神们   请问 为什么我构建目的基因到pet32a上,一直诱导不是很明显,试过许多条件   IPTG,温度,时间 。转到bl21和rosetta中  都没用。  我的目的基因444bp,构建到pet32a上差不多34kd左右吧,其他人构建其他的基因也有条30多kd的带,我想问是不是pet32a控质粒就是34kd左右呢??    我怎样才可以诱导明显呢??//
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顺利一生

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by stone2239 at 2016-05-07 22:42:33
是不明显还是没有?你确定诱导出了吗?载体构建好后测序了吗?会不会构建有误。

不明显,测序正确  我看了   没有问题
4楼2016-05-08 13:53:24
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stone2239

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
是不明显还是没有?你确定诱导出了吗?载体构建好后测序了吗?会不会构建有误。
2楼2016-05-07 22:42:33
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wlt728

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
是的,构建好了还要测序的,完了再诱导,你可以做个WB看看。有的时候,也可能是载体或者宿主菌不太合适!
I am not a hero , but I served with heroes!
3楼2016-05-08 10:56:40
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顺利一生

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by wlt728 at 2016-05-08 10:56:40
是的,构建好了还要测序的,完了再诱导,你可以做个WB看看。有的时候,也可能是载体或者宿主菌不太合适!

WB  不得有抗体才可以检测吗    可是我没有抗体哦   我还得重新构建到flag标签上,感觉挺麻烦的
5楼2016-05-08 13:55:29
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