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ggyu118

新虫 (初入文坛)

[求助] 蛋白纯化不出!急! 已有1人参与

最近在纯化一种蛋白,并且是一定要纯化出来的。大小事57KD 分别试了MBP,GST,HIS,标签,都不行,其中带有His标签的pRSETA载体,转入到rosetta中涂LB+氨苄+氯霉素板不长,摇菌也摇不起来,
1,有没有人知道是什么原因
后转入到BL21中,做了菌落PCR,选择大小正确的摇菌,但蛋白跑胶显示没有表达,elution buffer 和 beads中都什么都没有,2,这是什么情况呢
3,之前用MBP和GST标签表达时,显示诱导不明显,有什么好的办法吗

此外,还能提供一些什么建议吗,好用的载体什么的,万分感谢!急!……我是新手,好不容易攒了5个金币,希望得到靠谱的答案,拜托啦!
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随风飘摇11

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
是不是蛋白诱导条件的问题?试一试不同的诱导温度

[ 发自小木虫客户端 ]
天道酬勤
2楼2014-03-06 15:35:26
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ggyu118

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 随风飘摇11 at 2014-03-06 15:35:26
是不是蛋白诱导条件的问题?试一试不同的诱导温度

我是28度4小时,因为在沉淀中的也不多,所以老板说应该和温度关系不大,不过我打算找机会试一试……谢谢啦
3楼2014-03-06 18:22:28
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