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pcr条件的问题 已有1人参与
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我把番茄的几个基因重组到pcambia2300表达载体上，转化农杆菌后提取质粒，做pcr，有两个基因都成功p出来了，另一个p不出来。退火温度是58度，是不是要改一改温度？各位大神怎么做的？ 发自小木虫Android客户端 |
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3楼2016-04-17 00:25:49
原海亮
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【答案】应助回帖
感谢参与，应助指数 +1
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你使用的引物是对应基因的特异性引物？还是载体上的通用引物？如果是特异性引物，对应该基因能不能找到一个阳性对照？就是找个模板可以扩增出来该基因的。因为你现在挑取的是克隆，是不是正确的克隆还不知道，所以究竟是引物问题还是克隆本身就不正导致这样结果，你是需要借助阳性对照的。如果是载体上的通用引物，那么其他两个基因可以扩增，只有这个不行，推断应该是你克隆不正确，引物的问题应该不大，祝好！ 发自小木虫Android客户端 |
2楼2016-04-16 21:31:55
4楼2016-04-17 07:18:44
原海亮
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【答案】应助回帖
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喻德鹏: 金币+10, ★★★很有帮助 2016-04-17 22:24:59
喻德鹏: 金币+10, ★★★很有帮助 2016-04-17 22:24:59
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哦，如果特异性引物，你之前有用这个引物进行扩增目的条带么？还是这是第一次使用这个引物？你的单菌落有两种抗性只能说你的质粒进去了，但不能说明上面一定有你的目的基因了 发自小木虫Android客户端 |
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喻德鹏5楼2016-04-17 14:17:48
