应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » PCR问题
91/1返回列表
查看: 826  |  回复: 8
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

qll8384

新虫 (初入文坛)

[交流] PCR问题 已有3人参与

真菌基因组能够P出ITS序列，但是其余序列比如EF1-α，mtSSU等，都不能P出来？这是为啥呢？
有谁遇到过这样的事情？！
但是，有时候，重复相同的条件，相同的体系，尽然能出来一部分。
是在让人捉摸不透啊。
各位虫友，我们一般做25微升体系。EF1-α退火温度在53℃，时间是30s，有什么不妥的吗？
实验前期，P出来的相当顺利，后期，几乎不能出。
求原因。
谢谢大神哦
回复此楼

» 猜你喜欢
共同进步，统统升级
1楼 2015-01-13 22:52:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

kuaile5420

专家顾问 (著名写手)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-01-14 20:01:32
先缓一缓，分子实验就是这样，别担心，换个PCR体系试一试看看可以不哈，还有就是做PCR的体系是不是放置的时间长了，效果不好了，也可以拿个新的重复一下，祝你好运哈。
赞一下 回复此楼
坚持到底就是胜利！
2楼2015-01-13 23:13:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

18761615793

木虫 (正式写手)

小虫
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-01-14 20:01:41
对的，分子实验就是这样，看不见摸不着的，有时候说明都是好的，就是不出来结果，呵呵。多做几次。
退火温度53℃30s，25微升的体系没有什么不妥。（退火温度要根据你的引物确定）

还有，你是扩增一个真菌基因组DNA上的多少个序列？一共设计了多少对引物呢？
扩增大于2个序列以上的话，要多重PCR，不然扩不出来的，希望对你有所帮助
赞一下 回复此楼
todayisdifficult，tomorrowismoredifficult，butthedayaftertomorrowisbeautiful
3楼2015-01-14 09:42:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cosign

木虫 (正式写手)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-01-14 20:01:50
前期能P出来，现在P不出来了，估计是基因组出问题了，重新提一下基因组看看
赞一下 回复此楼
4楼2015-01-14 16:35:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

qll8384

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by cosign at 2015-01-14 16:35:05
前期能P出来，现在P不出来了，估计是基因组出问题了，重新提一下基因组看看

基因组的问题，我们已经重提过两次，但是还是一样的结果。不过最近有个事情，特别奇怪。实验室只有一个人能够P出来，其余的都表示很痛苦。这个着实解释不出来啊。我们用的药品，体系，PCR条件都一样。
赞一下 回复此楼
共同进步，统统升级
5楼2015-01-16 09:27:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

qll8384

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by kuaile5420 at 2015-01-13 23:13:50
先缓一缓，分子实验就是这样，别担心，换个PCR体系试一试看看可以不哈，还有就是做PCR的体系是不是放置的时间长了，效果不好了，也可以拿个新的重复一下，祝你好运哈。

谢谢，我也是决定，暂停试验。回头重看吧。
赞一下 回复此楼
共同进步，统统升级
6楼2015-01-16 09:30:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

qll8384

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 18761615793 at 2015-01-14 09:42:32
对的，分子实验就是这样，看不见摸不着的，有时候说明都是好的，就是不出来结果，呵呵。多做几次。
退火温度53℃30s，25微升的体系没有什么不妥。（退火温度要根据你的引物确定）

还有，你是扩增一个真菌基因组 ...

对了，你提到多重PCR，这个我也做了。但是我的序列是一条的。不过，这个确实出了几个条带。但是有些事非特异性的。在纯化上，个条带距离不是很大，亮度都差不都。所以就放弃了。谢谢你了
赞一下 回复此楼
共同进步，统统升级
7楼2015-01-16 09:32:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

18761615793

木虫 (正式写手)

小虫
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
5楼: Originally posted by qll8384 at 2015-01-16 09:27:20
基因组的问题，我们已经重提过两次，但是还是一样的结果。不过最近有个事情，特别奇怪。实验室只有一个人能够P出来，其余的都表示很痛苦。这个着实解释不出来啊。我们用的药品，体系，PCR条件都一样。...

引物也是一样的？如果引物也是一样的话。。嘿嘿，那就先缓缓在做吧
赞一下 回复此楼
todayisdifficult，tomorrowismoredifficult，butthedayaftertomorrowisbeautiful
8楼2015-01-16 09:40:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

qll8384

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
8楼: Originally posted by 18761615793 at 2015-01-16 09:40:40
引物也是一样的？如果引物也是一样的话。。嘿嘿，那就先缓缓在做吧...

引物却是一样，我估计是药品出问题了。
赞一下 回复此楼
共同进步，统统升级
9楼2015-01-16 10:15:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 qll8384 的主题更新
91/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭