| 查看: 1754 | 回复: 2 | ||
[求助]
cDNA PCR扩增问题
|
|
我提取了RNA，用生工M－MuLV第一链cDNA合成试剂盒合成cDNA，然后用CODEHOP法设计的简并引物进行PCR扩增。 之前，我用三步法PCR，结果电泳检测要么无条带，要么只有一条带（小于100bp，很可能是引物二聚体），要么两条带（一条大于100bp，一条小于100bp），更换PCR条件和引物，仍然这个结果。 后来，我尝试采用两步法PCR。PCR体系是25ul。PCR条件是：94度预变性3min。94度变性1min，68度退火延伸1min，进行30个循环。然后72度保温10min。扩增结果电泳检测只有一个条带，小于100bp，可能是引物二聚体。改变PCR条件，94度变性45s，68度退火延伸1min45s，进行30个循环，扩增结果电泳检测也是只有一个条带，小于100bp。更换不同的引物，PCR结果要么只有小于100bp的一条带，要么没有条带。 补充： 我待扩增的序列未知，所以对引物的设计是用CODEHOP法，通过对近缘种进行序列比对，找到保守区，再利用保守区的序列设计的简并引物。对引物的筛选是用Oligo 6软件。对目的片段大小的估计也是使用近缘种与引物的结合情况进行预测的。 出现这样的结果，是引物的问题，还是PCR条件的问题？我已进行了很多尝试，仍然得不到理想的结果。请各位帮个忙，感激不尽！！！ |
回复此楼» 猜你喜欢
留学--博士招生
已经有16人回复
-
化学工程，本211，求调剂，ab区不限
已经有4人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有162人回复
-
湖北师范大学招调剂啦
已经有7人回复
-
邵阳学院食品与化学工程学院硕士调剂
已经有0人回复
-
天津商业大学 生物与医药课题组招生
已经有0人回复
-
生物化工学硕招收调剂
已经有0人回复
-
广东石油化工学院2026年硕士研究生需要多名生物，制药工程，食品专业的调剂生
已经有0人回复
-
317分 一志愿江南大学 化学工程学硕 求调剂
已经有6人回复
-
化工申博
已经有1人回复
» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 【求助】请教cDNA-AFLP 实验的相关问题，请大家帮忙看看，谢谢
已经有15人回复
- RT-PCR逆转录加模板问题
已经有9人回复
- PCR扩增结果
已经有11人回复
- 大片段PCR扩增求助
已经有34人回复
- 求助！关于RT-PCR的问题！
已经有20人回复
- 反转录
已经有16人回复
- cDNA做普通PCR扩不出条带来
已经有13人回复
- ＲＴ－ＰＣＲ问题求助
已经有18人回复
- 定量pcr的污染问题
已经有6人回复
- 【求助】几个关于实时定量PCR的问题
已经有12人回复
- 【求助/交流】RT-real time pcr问题
已经有6人回复
- 【求助/交流】从RNA到cDNA合成再到克隆PCR的实验技巧和操作细节问题若干，寻求解答
已经有12人回复
- 【求助/交流】以cDNA为模板PCR扩增目的片段时条带较浅原因
已经有13人回复
yunzhifei
至尊木虫 (著名写手)
- 应助: 3 (幼儿园)
- 金币: 32331.8
- 红花: 39
- 帖子: 1090
- 在线: 587.4小时
- 虫号: 1460331
- 注册: 2011-10-25
- 性别: GG
- 专业: 基因组学
含羞草liu2楼2012-06-07 11:07:46
3楼2012-06-08 08:50:51
