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PCR扩不出条带
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扩一段3000多的片段 首先模版没问题，因为用这个模版扩其他的基因都扩出来了。 酶用的高保真的酶。 体系是 水 13微升 镁离子buffer 4微升 dNTP 1.6微升 F P 0.4微升 R P 0.4微升 模版 0.4微升 酶 0.2微升 程序是 98 2min 94 40s 50 40s 72 3min20s 72 7min 特别奇怪的一点是 ，我扩出来了一次，然后后来再也扩不出来。 而且电泳结果是任何条带都没有，连引物二聚体都没有。 这是怎么回事？ 发自小木虫IOS客户端 |
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可以看一下酶的说明书，高保真酶具有保真性，其实没必要使用，可能会降解掉模板和引物，你的2kb也不算长，一般的长片段可以扩增的长度是十几kb到二三十kb，你这也不需要，可以使用热启动Taq酶就可以，提高特异性灵敏度，但是你这个实验酶的问题好像还有其他原因，估计体系中就是没有扩增吧，不然引物二聚体都没有，你确定你的体系中充分有没有加全哦~ Taq酶的选择：http://www.detaibio.com/dna-taq-polymerase.html |
13楼2016-03-28 11:03:15
jifengyun321
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