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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » PCR扩不出条带
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pubblezhu

新虫 (初入文坛)

[求助] PCR扩不出条带

扩一段3000多的片段
首先模版没问题，因为用这个模版扩其他的基因都扩出来了。
酶用的高保真的酶。
体系是
水 13微升
镁离子buffer 4微升
dNTP 1.6微升
F P 0.4微升
R P 0.4微升
模版 0.4微升
酶 0.2微升
程序是
98 2min
94 40s
50 40s
72 3min20s
72 7min
特别奇怪的一点是 ，我扩出来了一次，然后后来再也扩不出来。
而且电泳结果是任何条带都没有，连引物二聚体都没有。
这是怎么回事？

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1楼 2016-03-26 19:39:20
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MarchZR

银虫 (小有名气)
引用回帖:
8楼: Originally posted by pubblezhu at 2016-03-28 08:14:29
高保真酶还有长短片段之分？
我用这个酶扩2000多的扩出来了
...

可以看一下酶的说明书，高保真酶具有保真性，其实没必要使用，可能会降解掉模板和引物，你的2kb也不算长，一般的长片段可以扩增的长度是十几kb到二三十kb，你这也不需要，可以使用热启动Taq酶就可以，提高特异性灵敏度，但是你这个实验酶的问题好像还有其他原因，估计体系中就是没有扩增吧，不然引物二聚体都没有，你确定你的体系中充分有没有加全哦~
Taq酶的选择：http://www.detaibio.com/dna-taq-polymerase.html
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13楼2016-03-28 11:03:15
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jifengyun321

新虫 (正式写手)
你可以将一次PCR的产物为模板再次扩增看看，有条带吗

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2楼2016-03-26 23:13:12
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pubblezhu

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by jifengyun321 at 2016-03-26 23:13:12
你可以将一次PCR的产物为模板再次扩增看看，有条带吗

那次没回收……

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3楼2016-03-27 16:55:03
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jifengyun321

新虫 (正式写手)
哦哦

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4楼2016-03-27 18:30:02
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