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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » PCR扩不出条带
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pubblezhu

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
9楼: Originally posted by 787719259 at 2016-03-28 08:28:57
我出现过你类似的情况，我扩的2000多的，换成长片段的酶后就扩出来了

我现在的问题
是十次里面两次扩的出来八次扩不出来

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11楼2016-03-28 09:15:25
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maixiaodaou

新虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by maixiaodaou at 2016-03-27 21:48:35
PCR仪有问题没？还有就是电泳时marker有条带没

引物温度适度的降低吧

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12楼2016-03-28 09:44:09
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MarchZR

银虫 (小有名气)
引用回帖:
8楼: Originally posted by pubblezhu at 2016-03-28 08:14:29
高保真酶还有长短片段之分？
我用这个酶扩2000多的扩出来了
...

可以看一下酶的说明书，高保真酶具有保真性，其实没必要使用，可能会降解掉模板和引物，你的2kb也不算长，一般的长片段可以扩增的长度是十几kb到二三十kb，你这也不需要，可以使用热启动Taq酶就可以，提高特异性灵敏度，但是你这个实验酶的问题好像还有其他原因，估计体系中就是没有扩增吧，不然引物二聚体都没有，你确定你的体系中充分有没有加全哦~
Taq酶的选择：http://www.detaibio.com/dna-taq-polymerase.html
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13楼2016-03-28 11:03:15
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sunny0819

新虫 (小有名气)
引物有问题吧

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14楼2016-03-29 00:09:45
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pubblezhu

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
13楼: Originally posted by MarchZR at 2016-03-28 11:03:15
可以看一下酶的说明书，高保真酶具有保真性，其实没必要使用，可能会降解掉模板和引物，你的2kb也不算长，一般的长片段可以扩增的长度是十几kb到二三十kb，你这也不需要，可以使用热启动Taq酶就可以，提高特异性灵 ...

如果以后我要用这个连载体转到植物中去，Taq酶的错配率会不会太高了

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15楼2016-03-30 22:03:28
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粒粒分明

新虫 (初入文坛)
我也遇到过，后来解决问题了。推荐你试试巢式PCR

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16楼2016-03-30 23:50:46
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MarchZR

银虫 (小有名气)
引用回帖:
15楼: Originally posted by pubblezhu at 2016-03-30 22:03:28
如果以后我要用这个连载体转到植物中去，Taq酶的错配率会不会太高了
...

你用错配率低的酶不就好了，没有热启动功能的酶错配都难以避免只是多少的问题
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17楼2016-03-31 08:58:24
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MarchZR

银虫 (小有名气)
引用回帖:
15楼: Originally posted by pubblezhu at 2016-03-30 22:03:28
如果以后我要用这个连载体转到植物中去，Taq酶的错配率会不会太高了
...

当然，巢式PCR也是特高特异性的方法，只是不是所有人都熟悉吧，哺乳用点特异性高的试剂来的简单~
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18楼2016-03-31 08:59:31
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