应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » PCR扩不出条带
52/1返回列表
查看: 3164  |  回复: 17
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

pubblezhu

新虫 (初入文坛)

[求助] PCR扩不出条带

扩一段3000多的片段
首先模版没问题，因为用这个模版扩其他的基因都扩出来了。
酶用的高保真的酶。
体系是
水 13微升
镁离子buffer 4微升
dNTP 1.6微升
F P 0.4微升
R P 0.4微升
模版 0.4微升
酶 0.2微升
程序是
98 2min
94 40s
50 40s
72 3min20s
72 7min
特别奇怪的一点是 ，我扩出来了一次，然后后来再也扩不出来。
而且电泳结果是任何条带都没有，连引物二聚体都没有。
这是怎么回事？

发自小木虫IOS客户端
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2016-03-26 19:39:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

pubblezhu

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
13楼: Originally posted by MarchZR at 2016-03-28 11:03:15
可以看一下酶的说明书，高保真酶具有保真性，其实没必要使用，可能会降解掉模板和引物，你的2kb也不算长，一般的长片段可以扩增的长度是十几kb到二三十kb，你这也不需要，可以使用热启动Taq酶就可以，提高特异性灵 ...

如果以后我要用这个连载体转到植物中去，Taq酶的错配率会不会太高了

发自小木虫IOS客户端
赞一下 回复此楼
15楼2016-03-30 22:03:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 18 个回答

jifengyun321

新虫 (正式写手)
你可以将一次PCR的产物为模板再次扩增看看，有条带吗

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
2楼2016-03-26 23:13:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

pubblezhu

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by jifengyun321 at 2016-03-26 23:13:12
你可以将一次PCR的产物为模板再次扩增看看，有条带吗

那次没回收……

发自小木虫IOS客户端
回复此楼
3楼2016-03-27 16:55:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jifengyun321

新虫 (正式写手)
哦哦

发自小木虫Android客户端
回复此楼
4楼2016-03-27 18:30:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 18 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +4 Aj1rhIDL5ixY 2026-09-14 4/200 2026-09-17 14:27 by ObVzqQQh1rrE
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 Aj1rhIDL5ixY 2026-09-14 4/200 2026-09-17 14:27 by ObVzqQQh1rrE
[考研] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +4 0pYnUiPDfdnk 2026-09-14 4/200 2026-09-17 14:15 by ObVzqQQh1rrE
[硕博家园] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +4 yaCh4X3wd045 2026-09-14 4/200 2026-09-17 13:17 by ObVzqQQh1rrE
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +5 s3fFTmArrBt6 2026-09-14 6/300 2026-09-17 12:29 by ObVzqQQh1rrE
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 mibUvS8DDCwf 2026-09-15 4/200 2026-09-17 06:26 by k06BKNblrGRH
[公派出国] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 23jxep3nCNZb 2026-09-14 3/150 2026-09-17 03:52 by k06BKNblrGRH
[考研] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +5 6F5UbRU2I5hL 2026-09-14 5/250 2026-09-17 03:14 by Tql5LQhh5rLK
[考研] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +6 6F5UbRU2I5hL 2026-09-14 6/300 2026-09-17 03:14 by Tql5LQhh5rLK
[公派出国] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +6 s3fFTmArrBt6 2026-09-14 6/300 2026-09-17 02:38 by Tql5LQhh5rLK
[公派出国] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +5 s3fFTmArrBt6 2026-09-13 7/350 2026-09-17 02:14 by Tql5LQhh5rLK
[考研] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +7 LwdutQ8HoqWP 2026-09-13 7/350 2026-09-17 01:52 by Tql5LQhh5rLK
[硕博家园] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +6 LwdutQ8HoqWP 2026-09-13 6/300 2026-09-17 01:50 by Tql5LQhh5rLK
[考研] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +7 QUjhNVAcOSff 2026-09-13 8/400 2026-09-16 18:37 by rRvxEj3zorCy
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +5 6F5UbRU2I5hL 2026-09-14 6/300 2026-09-16 17:27 by i3KBRD19ERkG
[考博] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 6F5UbRU2I5hL 2026-09-14 4/200 2026-09-16 17:00 by i3KBRD19ERkG
[考博] 上海工程技术大学激光智能制造课题组｜2027级博士研究生招生公告 +7 水士口 2026-09-16 8/400 2026-09-16 13:47 by kkklens
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +5 3n8v2C8RimXI 2026-09-13 5/250 2026-09-16 02:50 by DgNGHc3h5tPl
[考博] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +7 3n8v2C8RimXI 2026-09-13 7/350 2026-09-16 02:35 by DgNGHc3h5tPl
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +5 s3fFTmArrBt6 2026-09-14 5/250 2026-09-15 16:35 by CgyNCDVNhGVg
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭