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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » PCR扩不出，电泳出现smearr,求解
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sptliu

新虫 (初入文坛)

[交流] PCR扩不出，电泳出现smearr,求解 已有2人参与

我是从人类基因组中PCR扩增一段2000BP左右的片段用于测序，最左边MARKER的最上一根条带就是2000BP，最右边是用的TAKARA 的PRIMERSTAR酶，其余用的是生工的PFU酶。以前一直用PRIMERSTAR扩出来过几次，但后来就会总出现孔附近很亮的SMEAR,目的条带有时能很浅的出来（如右边第二个），有时出不来（如最右边一个），无法解决。现在换PFU，还是有SMEAR且目的条带未出现，请大家分析下。
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1楼 2012-04-11 21:38:13
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zhaohq1209

铁杆木虫 (著名写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
高保真是用降低效率作为代价的。

建议lz用普通rTaq扩增试一下
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我有一个梦想，我梦想有一天，我们的人民可以根据自己的意愿与消费能力，居住在自己愿意居住的地方。
2楼2012-04-11 21:42:58
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atlanticwi

金虫 (正式写手)

琴美喜欢发呆 不喜欢发脾气
★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
小丹木木: 金币+3, 嗯......你天可爱了 2012-04-12 13:37:27
嗯..............
1. 针对PrimeSTAR的Smear，看你有从孔中到目的条带的连续性，建议降低模板量再扩，做几个梯度稀释看看（10倍，100倍）
2. pfu的Smear有你的条带范围，建议先从调整退火温度，5度上调再看看情况
祝实验顺利 若有说错请高手指点哦
赞一下 回复此楼
Let God do with it as He wills
3楼2012-04-11 21:45:17
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