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sptliu

新虫 (初入文坛)

[交流] PCR扩不出,电泳出现smearr,求解 已有2人参与

我是从人类基因组中PCR扩增一段2000BP左右的片段用于测序,最左边MARKER的最上一根条带就是2000BP,最右边是用的TAKARA 的PRIMERSTAR酶,其余用的是生工的PFU酶。以前一直用PRIMERSTAR扩出来过几次,但后来就会总出现孔附近很亮的SMEAR,目的条带有时能很浅的出来(如右边第二个),有时出不来(如最右边一个),无法解决。现在换PFU,还是有SMEAR且目的条带未出现,请大家分析下。
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atlanticwi

金虫 (正式写手)

琴美喜欢发呆 不喜欢发脾气

★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
小丹木木: 金币+3, 嗯......你天可爱了 2012-04-12 13:37:27
嗯..............
1. 针对PrimeSTAR的Smear,看你有从孔中到目的条带的连续性,建议降低模板量再扩,做几个梯度稀释看看(10倍,100倍)
2. pfu的Smear有你的条带范围,建议先从调整退火温度,5度上调再看看情况
祝实验顺利 若有说错请高手指点哦
Let God do with it as He wills
3楼2012-04-11 21:45:17
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zhaohq1209

铁杆木虫 (著名写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
高保真是用降低效率作为代价的。

建议lz用普通rTaq扩增试一下
我有一个梦想,我梦想有一天,我们的人民可以根据自己的意愿与消费能力,居住在自己愿意居住的地方。
2楼2012-04-11 21:42:58
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