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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » primerstar PCR没有条带是为什么呢？
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xianglixie3

铜虫 (小有名气)

[求助] primerstar PCR没有条带是为什么呢？ 已有3人参与

如题，我用Cdna 扩增表达片段大概2000-3000bp。
Cdna 没有问题，扩增了tub 有带。
我用Taq 酶扩增的时候有带，因为不是高保真的酶所以我想用primerstar 获得片段
试过加了6%DMSO  试过 降低退火温度 本来的退火温度是67 降到了62 还是没有条带
延伸时间用的2-3min
求解!
我都整了一个月了 没有带呀 要死要活的。
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1楼 2016-03-18 08:38:35
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

310013

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2016-03-19 08:50:50
Takara PrimeSTAR HS DNA Polymerase?我也用这个，效果不错。无需预变性及最后延伸这两步，直接进行循环。不过退火时间与退火温度有关，你按说明书来操作。它的延伸效率是 1kb/min。祝实验顺利
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7楼2016-03-18 12:06:05
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普通回帖

卡维斯

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
xianglixie3: 金币+5, ★★★很有帮助, 终于扩出来了 回收之后也超级亮 谢谢 2016-03-19 08:06:38
cDNA扩增长片段是有各种问题的，模板质量得好，浓度合适；选用合适的酶；引物质量合格，高保真酶是应该用高退火的，你可以按照酶的说明书试验一下，扩增效率2000bp/min吧？不用那么长时间。
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2楼2016-03-18 09:46:30
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xianglixie3

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 卡维斯 at 2016-03-18 09:46:30
cDNA扩增长片段是有各种问题的，模板质量得好，浓度合适；选用合适的酶；引物质量合格，高保真酶是应该用高退火的，你可以按照酶的说明书试验一下，扩增效率2000bp/min吧？不用那么长时间。

你的意思说 它的退火温度应该比普通酶高是吗
我找找说明书重新看看 然后延伸时间降一些 再做一次
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3楼2016-03-18 09:53:24
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卡维斯

金虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by xianglixie3 at 2016-03-18 09:53:24
你的意思说 它的退火温度应该比普通酶高是吗
我找找说明书重新看看 然后延伸时间降一些 再做一次...

对，仔细研究下说明书按他说的就可以，加油
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4楼2016-03-18 09:58:53
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xianglixie3

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 卡维斯 at 2016-03-18 09:58:53
对，仔细研究下说明书按他说的就可以，加油...

我还想问问  我看了说明书了  它98℃ 10sec   55℃   5sec   72℃  10sec/kb     30个循环      他没有普通pcr 前面还94度 一下 什么的 就直接循环吗、
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5楼2016-03-18 10:20:24
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王爱沫1

禁虫 (小有名气)
感谢参与，应助指数 +1
本帖内容被屏蔽
6楼2016-03-18 11:24:32
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xianglixie3

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by 310013 at 2016-03-18 12:06:05
Takara PrimeSTAR HS DNA Polymerase?我也用这个，效果不错。无需预变性及最后延伸这两步，直接进行循环。不过退火时间与退火温度有关，你按说明书来操作。它的延伸效率是 1kb/min。祝实验顺利

我上午直接循环做了一下 正在电泳 谢谢
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8楼2016-03-18 14:28:13
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western_99

捐助贵宾 (小有名气)
联系我吧，我们可以帮你做
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9楼2016-03-18 15:31:56
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xianglixie3

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by 310013 at 2016-03-18 12:06:05
Takara PrimeSTAR HS DNA Polymerase?我也用这个，效果不错。无需预变性及最后延伸这两步，直接进行循环。不过退火时间与退火温度有关，你按说明书来操作。它的延伸效率是 1kb/min。祝实验顺利

谢谢 我做出来了
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10楼2016-03-19 08:07:15
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