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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 综合其他 » 大家帮我看看你这个扩增后的cDNA能用于建酵母双杂交文库吗？ 求指点 谢谢~
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think-edge

金虫 (小有名气)

[交流] 大家帮我看看你这个扩增后的cDNA能用于建酵母双杂交文库吗？ 求指点 谢谢~ 已有4人参与

 http://\"大家帮我看看你这个扩增后的cDNA能用于建酵母双杂交文库吗？  求指点  谢谢~\"
我没有用Clontech的Advantage 2 PCR kit，而是用用了takara的primerstar进行了“LD-PCR”，延伸时间7min（+5s each cycle），25个循环，结果如图示，没有经验，不知道是不是没有扩增成功啊？  求指定 1和2为样品扩增副孔，貌似smear条带与阳性对照相比弱好多，这个怎么解决？  可以用于下一步纯化，然后与线性化的rec载体共转酵母Y187吗？  

谢谢~  祝好！

 http://\"大家帮我看看你这个扩增后的cDNA能用于建酵母双杂交文库吗？  求指点  谢谢~-1\"
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1楼 2014-10-28 10:50:38
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think-edge

金虫 (小有名气)
http://image.keyan.cc/data/bcs/2 ... _1414464747_973.jpg

大家帮我看看你这个扩增后的cDNA能用于建酵母双杂交文库吗？  求指点  谢谢~-2
LD-PCR.jpg
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2楼2014-10-28 10:53:02
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Neo2000

木虫 (著名写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
2楼: Originally posted by think-edge at 2014-10-28 10:53:02
http://image.keyan.cc/data/bcs/2014/1028/w98h1229923_1414464747_973.jpg


LD-PCR.jpg

你那个合成的量肯定不够的，加几个循环试试

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3楼2014-11-10 10:01:16
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think-edge

金虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by Neo2000 at 2014-11-10 10:01:16
你那个合成的量肯定不够的，加几个循环试试
...

嗯  谢谢您  我已经买了clontech的advantage重新扩增了   现在纯化后有2.5ug   打算拿这个建库

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4楼2014-11-10 12:56:30
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meng蓝色桃子

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
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4楼: Originally posted by think-edge at 2014-11-10 12:56:30
嗯  谢谢您  我已经买了clontech的advantage重新扩增了   现在纯化后有2.5ug   打算拿这个建库
...

你好，请问你的库构建好了吗？我的LD-PCR产物过柱纯化后就没了，请问你知道是什么原因吗，困惑许久了，谢谢

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5楼2017-04-15 07:59:20
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yuanjingping

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
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5楼: Originally posted by meng蓝色桃子 at 2017-04-15 07:59:20
你好，请问你的库构建好了吗？我的LD-PCR产物过柱纯化后就没了，请问你知道是什么原因吗，困惑许久了，谢谢
...

LD-PCR产物过柱纯化后就没了什么原因可以告知下吗？
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6楼2017-04-15 11:22:54
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wpjshr

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by yuanjingping at 2017-04-15 11:22:54
LD-PCR产物过柱纯化后就没了什么原因可以告知下吗？...

同求
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7楼2017-04-18 18:52:13
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