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cjj1650木虫 (小有名气)
民工
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[求助]
普通taq扩增有带，primerstar扩增无带 已有1人参与
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各位大神，我克隆一个基因的ORF全长，同样的引物，用普通Taq酶扩增有单一条带，大小也和目的片段相同。但换了高保真Primerstar却扩增不出来，求解！ PCR体系差不多50ul，Ta是同样的温度，就是退火时间缩短为15 s。 |
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我欲乘风归去
木虫 (正式写手)
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2楼2015-03-29 21:00:58
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【答案】应助回帖
感谢参与，应助指数 +1
| 高保真酶保真性好？原因是它可以切掉错配的碱基，那么同样的，它也可能将你的模板链降解掉导致你扩增不出来，所以如果实验的要求不是非常精准（比如要针对一个碱基进行研究的），不建议使用保真性的酶，Taq聚合酶扩增如果不好，可以使用热启动聚合http://www.detaibio.com/relia-hotstart-polymerase.html，我们都是，小于10kb的扩增效果都很好，而且是和多重PCR，我们使用的还能在荧光定量PCR中使用，确实不错哦 |
3楼2015-03-30 09:04:26