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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 加A尾
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changyi_23

金虫 (小有名气)

[求助] 加A尾

用primerstar做的PCR产物，想要做TA克隆，用什么条件在PCR产物后面加上A尾呀~希望有详细的体系呢~O(∩_∩)O谢谢~
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1楼 2012-07-27 20:21:20
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robert-RBT

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
PCR结束后，直接加Taq酶，72度10分钟即可。
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2楼2012-07-27 20:51:23
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scutphoenix

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
TAKARA有个专门的加A试剂盒，
不过以前做的时候，师兄教的也是加上Taq和dNTP，72℃30min
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3楼2012-07-28 00:11:55
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137167741

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
用TAKARA的TAQ酶再跑一遍就出来了。
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总有一天我要修改用户名。
4楼2012-07-28 09:30:59
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proetin23

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
二楼是正解。如果是50ul体系的话，primerstar扩完后，往体系中加0.3-0.5ul普通tag酶，混匀，72度10min，就ok了。有时候忘了末端加a，直接回收了，那么你可以直接在回收产物中加普通taq酶buffer和酶、dntp，72度10min即可
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5楼2012-07-28 10:06:48
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healy13

禁虫 (小有名气)
感谢参与，应助指数 +1
本帖内容被屏蔽
6楼2012-07-30 09:11:45
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austere
引用回帖:
2楼: Originally posted by robert-RBT at 2012-07-27 20:51:23
PCR结束后，直接加Taq酶，72度10分钟即可。

7楼2012-07-30 12:44:37
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