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changyi_23

金虫 (小有名气)

[求助] 加A尾

用primerstar做的PCR产物,想要做TA克隆,用什么条件在PCR产物后面加上A尾呀~希望有详细的体系呢~O(∩_∩)O谢谢~
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proetin23

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
二楼是正解。如果是50ul体系的话,primerstar扩完后,往体系中加0.3-0.5ul普通tag酶,混匀,72度10min,就ok了。有时候忘了末端加a,直接回收了,那么你可以直接在回收产物中加普通taq酶buffer和酶、dntp,72度10min即可
5楼2012-07-28 10:06:48
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robert-RBT

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
PCR结束后,直接加Taq酶,72度10分钟即可。
2楼2012-07-27 20:51:23
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scutphoenix

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
TAKARA有个专门的加A试剂盒,
不过以前做的时候,师兄教的也是加上Taq和dNTP,72℃30min
3楼2012-07-28 00:11:55
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137167741

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
用TAKARA的TAQ酶再跑一遍就出来了。
总有一天我要修改用户名。
4楼2012-07-28 09:30:59
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