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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » primerstar PCR没有条带是为什么呢？
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jackyoung

新虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 卡维斯 at 2016-03-18 09:46:30
cDNA扩增长片段是有各种问题的，模板质量得好，浓度合适；选用合适的酶；引物质量合格，高保真酶是应该用高退火的，你可以按照酶的说明书试验一下，扩增效率2000bp/min吧？不用那么长时间。

别坑人，小日本的东西都浮夸，按2k/min是有点儿坑的。我觉得他的原因:
1.瞎折腾，ps酶的buffer有优化，DMSO什么的可以先不用试，直接搞个56-64的梯度试试看，第一步不行先用Taq预括增，没有的话首先怀疑引物，其次是模板;
2.cDNA质量待确认，由于片段较大，反转录的时候一定要用好一点的RT，反转录要保证质量;
3.可以怀疑下引物，至少是认真确认一下你的引物和序列，就有那傻缺把引物设计在启动子或基因下游，没有结果很正常。

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CestLaVie
11楼2016-03-19 08:34:47
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匿名

用户注销 (小有名气)
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12楼2016-03-30 15:02:17
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MeTeor3

金虫 (初入文坛)
啥玩意
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13楼2018-08-10 20:13:32
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鱼丸木有鱼

铁虫 (正式写手)
引用回帖:
7楼: Originally posted by 310013 at 2016-03-18 12:06:05
Takara PrimeSTAR HS DNA Polymerase?我也用这个，效果不错。无需预变性及最后延伸这两步，直接进行循环。不过退火时间与退火温度有关，你按说明书来操作。它的延伸效率是 1kb/min。祝实验顺利

为啥无需预变性和最后的延伸呢？

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14楼2018-08-11 07:01:28
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