24小时热门版块排行榜    

查看: 4777  |  回复: 13

jackyoung

新虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 卡维斯 at 2016-03-18 09:46:30
cDNA扩增长片段是有各种问题的,模板质量得好,浓度合适;选用合适的酶;引物质量合格,高保真酶是应该用高退火的,你可以按照酶的说明书试验一下,扩增效率2000bp/min吧?不用那么长时间。

别坑人,小日本的东西都浮夸,按2k/min是有点儿坑的。我觉得他的原因:
1.瞎折腾,ps酶的buffer有优化,DMSO什么的可以先不用试,直接搞个56-64的梯度试试看,第一步不行先用Taq预括增,没有的话首先怀疑引物,其次是模板;
2.cDNA质量待确认,由于片段较大,反转录的时候一定要用好一点的RT,反转录要保证质量;
3.可以怀疑下引物,至少是认真确认一下你的引物和序列,就有那傻缺把引物设计在启动子或基因下游,没有结果很正常。

发自小木虫Android客户端
CestLaVie
11楼2016-03-19 08:34:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

匿名

用户注销 (小有名气)

本帖仅楼主可见
12楼2016-03-30 15:02:17
已阅   申请MolEPI   回复此楼   编辑   查看我的主页

MeTeor3

金虫 (初入文坛)

啥玩意
13楼2018-08-10 20:13:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

鱼丸木有鱼

铁虫 (正式写手)

引用回帖:
7楼: Originally posted by 310013 at 2016-03-18 12:06:05
Takara PrimeSTAR HS DNA Polymerase?我也用这个,效果不错。无需预变性及最后延伸这两步,直接进行循环。不过退火时间与退火温度有关,你按说明书来操作。它的延伸效率是 1kb/min。祝实验顺利

为啥无需预变性和最后的延伸呢?

发自小木虫IOS客户端
14楼2018-08-11 07:01:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 xianglixie3 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 一志愿上海交大生物与医药专硕324分,求调剂 +6 jiajunX 2026-03-22 6/300 2026-03-25 23:05 by licg0208
[考研] 一志愿哈工大,085400,320,求调剂 +4 gdlf9999 2026-03-24 4/200 2026-03-25 23:01 by boxking200
[考研] 334分 一志愿武理-080500 材料求调剂 +4 李李不服输 2026-03-25 4/200 2026-03-25 21:26 by 星空星月
[考研] 材料调剂 5+3 想要一壶桃花水 2026-03-25 6/300 2026-03-25 18:20 by xcjcqu
[考研] 求b区院校调剂 +4 周56 2026-03-24 5/250 2026-03-25 17:12 by yishunmin
[考研] 333求调剂 +6 87639 2026-03-21 11/550 2026-03-25 16:17 by 87639
[考研] 347求调剂 +4 L when 2026-03-25 4/200 2026-03-25 13:37 by cocolv
[考研] 求调剂 一志愿 本科 北科大 化学 343 +4 13831862839 2026-03-24 5/250 2026-03-25 09:47 by 无际的草原
[考研] 化学调剂 +6 yzysaa 2026-03-21 6/300 2026-03-25 09:27 by aa331100
[考研] 求调剂一志愿武汉理工大学材料工程(085601) +5 WW.' 2026-03-23 7/350 2026-03-24 14:50 by sprinining
[考研] 一志愿重庆大学085700资源与环境,总分308求调剂 +7 墨墨漠 2026-03-23 8/400 2026-03-23 20:36 by Creta
[考研] 工科0856求调剂 +5 沐析汀汀 2026-03-21 5/250 2026-03-23 17:56 by 海瑟薇-
[考研] 328求调剂 +4 LHHL66 2026-03-23 4/200 2026-03-23 14:55 by lbsjt
[考研] 263求调剂 +6 yqdszhdap- 2026-03-22 9/450 2026-03-23 12:57 by yqdszhdap-
[考研] 317求调剂 +12 申子申申 2026-03-19 18/900 2026-03-22 22:23 by luoyongfeng
[考研] 280分求调剂 一志愿085802 +4 PUMPT 2026-03-22 7/350 2026-03-22 22:13 by 星空星月
[考研] 324求调剂 +6 lucky呀呀呀鸭 2026-03-20 6/300 2026-03-22 16:01 by ColorlessPI
[基金申请] 学校已经提交到NSFC,还能修改吗? 40+4 babangida 2026-03-19 9/450 2026-03-21 16:12 by babangida
[考研] 330求调剂0854 +3 assdll 2026-03-21 3/150 2026-03-21 13:01 by 搏击518
[考研] 材料学硕297已过四六级求调剂推荐 +11 adaie 2026-03-19 11/550 2026-03-20 21:30 by laoshidan
信息提示
请填处理意见