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xianglixie3

铜虫 (小有名气)

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[求助] primerstar PCR没有条带是为什么呢？已有3人参与

如题，我用Cdna 扩增表达片段大概2000-3000bp。
Cdna 没有问题，扩增了tub 有带。
我用Taq 酶扩增的时候有带，因为不是高保真的酶所以我想用primerstar 获得片段
试过加了6%DMSO 试过降低退火温度本来的退火温度是67 降到了62 还是没有条带
延伸时间用的2-3min
求解!
我都整了一个月了没有带呀要死要活的。

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1楼 2016-03-18 08:38:35

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鱼丸木有鱼

铁虫 (正式写手)

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引用回帖:

7楼: Originally posted by 310013 at 2016-03-18 12:06:05
Takara PrimeSTAR HS DNA Polymerase?我也用这个，效果不错。无需预变性及最后延伸这两步，直接进行循环。不过退火时间与退火温度有关，你按说明书来操作。它的延伸效率是 1kb/min。祝实验顺利

为啥无需预变性和最后的延伸呢？

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14楼2018-08-11 07:01:28

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卡维斯

金虫 (正式写手)

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【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
xianglixie3: 金币+5, ★★★很有帮助, 终于扩出来了回收之后也超级亮谢谢 2016-03-19 08:06:38

cDNA扩增长片段是有各种问题的，模板质量得好，浓度合适；选用合适的酶；引物质量合格，高保真酶是应该用高退火的，你可以按照酶的说明书试验一下，扩增效率2000bp/min吧？不用那么长时间。

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2楼2016-03-18 09:46:30

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xianglixie3

铜虫 (小有名气)

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引用回帖:

2楼: Originally posted by 卡维斯 at 2016-03-18 09:46:30
cDNA扩增长片段是有各种问题的，模板质量得好，浓度合适；选用合适的酶；引物质量合格，高保真酶是应该用高退火的，你可以按照酶的说明书试验一下，扩增效率2000bp/min吧？不用那么长时间。

你的意思说它的退火温度应该比普通酶高是吗
我找找说明书重新看看然后延伸时间降一些再做一次