24小时热门版块排行榜    

查看: 5054  |  回复: 13
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

xianglixie3

铜虫 (小有名气)

[求助] primerstar PCR没有条带是为什么呢? 已有3人参与

如题,我用Cdna 扩增表达片段大概2000-3000bp。
Cdna 没有问题,扩增了tub 有带。
我用Taq 酶扩增的时候有带,因为不是高保真的酶所以我想用primerstar 获得片段
试过加了6%DMSO  试过 降低退火温度 本来的退火温度是67 降到了62 还是没有条带
延伸时间用的2-3min
求解!
我都整了一个月了 没有带呀 要死要活的。
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

王爱沫1

禁虫 (小有名气)

感谢参与,应助指数 +1
本帖内容被屏蔽

6楼2016-03-18 11:24:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 14 个回答

卡维斯

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
xianglixie3: 金币+5, ★★★很有帮助, 终于扩出来了 回收之后也超级亮 谢谢 2016-03-19 08:06:38
cDNA扩增长片段是有各种问题的,模板质量得好,浓度合适;选用合适的酶;引物质量合格,高保真酶是应该用高退火的,你可以按照酶的说明书试验一下,扩增效率2000bp/min吧?不用那么长时间。
2楼2016-03-18 09:46:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xianglixie3

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 卡维斯 at 2016-03-18 09:46:30
cDNA扩增长片段是有各种问题的,模板质量得好,浓度合适;选用合适的酶;引物质量合格,高保真酶是应该用高退火的,你可以按照酶的说明书试验一下,扩增效率2000bp/min吧?不用那么长时间。

你的意思说 它的退火温度应该比普通酶高是吗
我找找说明书重新看看 然后延伸时间降一些 再做一次
3楼2016-03-18 09:53:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

卡维斯

金虫 (正式写手)

引用回帖:
3楼: Originally posted by xianglixie3 at 2016-03-18 09:53:24
你的意思说 它的退火温度应该比普通酶高是吗
我找找说明书重新看看 然后延伸时间降一些 再做一次...

对,仔细研究下说明书按他说的就可以,加油
4楼2016-03-18 09:58:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 奇怪,两个人的filecode固定段从头到尾一模一样 +4 布布和一二 2026-08-10 4/200 2026-08-10 14:50 by 医学老男孩
[基金申请] 国自然结果 +4 Vierhys 2026-08-10 6/300 2026-08-10 14:29 by anjeeshine
[基金申请] 我的国基提前知道中了,可是同事的操作让我实在接受不了,怎么会有这样的人 +6 家与远方 2026-08-10 9/450 2026-08-10 14:29 by 爱看书的可乐
[基金申请] 好奇怪的filecode +4 布布和一二 2026-08-08 5/250 2026-08-10 14:20 by 冰心玉壶晴
[基金申请] 综述论文作为代表作会不会影响评审专家的印象分? +10 yufeiwaner 2026-08-09 10/500 2026-08-10 13:44 by cdutwml
[基金申请] 据悉今年马上要出结果了 +7 瞬息宇宙 2026-08-10 8/400 2026-08-10 12:42 by Vivilian
[基金申请] FileCode能看出啥? +3 要乐观耀哥 2026-08-10 6/300 2026-08-10 12:33 by 要乐观耀哥
[基金申请] 这样的filecode谁见过 +11 布布和一二 2026-08-08 22/1100 2026-08-10 11:10 by wmfsnow
[基金申请] fileCode有新解读? +10 Tide man 2026-08-08 18/900 2026-08-09 12:55 by 仁砚薪传
[基金申请] 关于豆爷回答的JTJC与%2F数量 +5 yang182083 2026-08-06 7/350 2026-08-08 18:29 by zhanghaozhu
[基金申请] 基金中了 +14 laoda193707 2026-08-06 14/700 2026-08-08 00:23 by 实验小白ha
[基金申请] 娱乐 +6 Tide man 2026-08-03 6/300 2026-08-07 22:40 by 铁帽子农民
[基金申请] 听说今天filecode变了 +24 布布和一二 2026-08-06 47/2350 2026-08-07 16:02 by zhiyanjiang
[基金申请] filecode变化情况 +6 布布和一二 2026-08-07 22/1100 2026-08-07 14:45 by 且听虎啸
[基金申请] 大家散了吧,后缀研究没有意义,别浪费时间了,过好目前的每一天,不要焦虑 +5 Tide man 2026-08-06 7/350 2026-08-07 13:11 by 医学老男孩
[基金申请] 求各位大神看下 100+6 hpkpkpkp 2026-08-05 33/1650 2026-08-06 14:49 by zhiyanjiang
[基金申请] 影响面上的因素 +8 布布和一二 2026-08-05 11/550 2026-08-06 10:41 by 宝贝虫子
[基金申请] 好消息?这个有何含义??? +8 Tide man 2026-08-05 10/500 2026-08-05 16:14 by xmuxiaoyu
[基金申请] 有没有H口的?有收到消息的吗? +3 超级海虾 2026-08-04 3/150 2026-08-04 17:26 by 学教育滴
[基金申请] 纯娱乐,不喜欢勿喷 +7 Tide man 2026-08-04 10/500 2026-08-04 15:10 by loufangrui
信息提示
请填处理意见