目前想将我的目的基因插入到带有嘌呤霉素的质粒上，做吉布森Gibson assembly组装的方法连了一个月了，没有连接成功
如:目的基因是MT，嘌呤霉素基因是pac，质粒为PA
设计同源臂引物：MT-up-F\R；MT-Pac-F\R;MT-dn-F/R;PA-F/R
一共设计4对引物，分别先进性PCR扩增，胶回收，条带正确，然后用胶回收产物进行吉布森组装将三个片段一起连接(MT-up和带同源臂的嘌呤霉素基因MT-pac和MT-dn与PA载体连接，在进行转化
求助的问题CR与胶回收的电泳图条带大小都正确，就是转化完，第二天板子上什么也没长，没有单克隆出现?
不知道问题出在哪里了，有没有小伙伴懂得，帮我分析一下，或者请教探讨一下，谢谢

 返回小木虫查看更多