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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 生物化学 » 克隆-吉布森组装-转化板不长
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静心聆听

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克隆-吉布森组装-转化板不长
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目前想将我的目的基因插入到带有嘌呤霉素的质粒上，做吉布森Gibson assembly组装的方法连了一个月了，没有连接成功
如:目的基因是MT，嘌呤霉素基因是pac，质粒为PA
设计同源臂引物：MT-up-F\R；MT-Pac-F\R;MT-dn-F/R;PA-F/R
一共设计4对引物，分别先进性PCR扩增，胶回收，条带正确，然后用胶回收产物进行吉布森组装将三个片段一起连接(MT-up和带同源臂的嘌呤霉素基因MT-pac和MT-dn与PA载体连接，在进行转化
求助的问题CR与胶回收的电泳图条带大小都正确，就是转化完，第二天板子上什么也没长，没有单克隆出现?
不知道问题出在哪里了，有没有小伙伴懂得，帮我分析一下，或者请教探讨一下，谢谢

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1楼 2021-06-26 16:42:05
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Angler'2楼
2021-06-26 16:44   回复  
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Jzhang2133楼
2021-06-26 16:47   回复  
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tzynew4楼
2021-06-26 16:48   回复  
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Michael9895楼
2021-06-26 17:02   回复  
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梦想?丰满6楼
2021-06-26 17:02   回复  
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rubychiu7楼
2021-06-26 17:06   回复  
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角动量神秘8楼
2021-06-26 17:10   回复  
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svfh29709楼
2021-06-26 17:13   回复  
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