同样的模板,同样的条件试剂,隔了一周就死活扩不出目的条带了
纯菌菌液提取的基因组dna作为模板,25微升体系,目的条带片段大小约350bp,上周都能扩到清晰目的条带,但这周重新跑就一直扩不出来了,只有杂带,marker2000很清晰应该不是跑胶的问题。求解为什么,更换新的试剂、引物、水跑了七八遍了还是没有,退火温度也从50-60℃都尝试过了。PCR反应条件为:94℃/10 min; 94℃/30 s, 55℃/40 s, 72℃/1 min, 35个循环; 72℃/10 min。
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重新提取dna试试?
是不是模板浓度降低了
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