关于蛋白质的分离纯化
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蛋白质的分离纯化是生物化学技术中的重要内容,在科研和生产中都有重要作用。蛋白质纯化的流程大致包括选材及预处理、细胞破碎及抽提、初步提取和精制纯化等部分,根据具体的纯化目的和要求可以有所不同。
选材的主要原则是原料易得,蛋白含量高,最好便于纯化。蛋白质的主要来源包括动物、植物和微生物。由于种属差异及培养条件和时间的差别,其蛋白含量可相差很大,提取难度也完全不同。
一般植物细胞含纤维素,坚韧,不易破碎,且多含酚类物质,易氧化产生有色物质,难以除去。其液泡中又常含有酸性代谢物,会改变溶液的pH。微生物因为容易培养而较为常用,但也需要破碎细胞壁。动物细胞没有细胞壁,相对容易处理,但往往成本较高。
选定材料之后,一般都需要进行简单的预处理,快速去除不需要的部分,以利于蛋白质的提取操作。常见的预处理包括植物种子去壳、脱脂,叶片清洗、去除干枯坏死组织;动物组织清洗血污,去除皮毛、脂肪、神经、血管;微生物发酵液细胞分离和絮凝等。
如目的蛋白在细胞内,需要进行细胞破碎,使蛋白释放出来。动物细胞可用细胞破碎机、匀浆器、、超声波、丙酮干粉等方法破碎。植物可用石英砂研磨或纤维素酶处理。微生物的细胞壁是一个大分子,破碎较难。有超声振荡、研磨、高压、溶菌酶、细胞自溶等方法。
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细胞破碎现在都用高压细胞破碎机了,效果比其他方法好很多,完全可以替代超声,省时省力,推荐大家使用
求推荐性价比高使用效果好的高压细胞破碎机~
如果目的蛋白定位在细胞核或某个细胞器中,一般还要通过差速离心等方法分离细胞核或相应细胞器。这样可以减少很多杂蛋白,有助于后续纯化。
请教一下所谓杂蛋白是不是就是目标蛋白以外的蛋白
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