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有什么办法和酶可以防止dUTP扩增,而仅扩增dNTP

作者 抽象派单纯
来源: 小木虫 250 5 举报帖子
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最近想做一个筛选。

想问下大家,有没有什么办法或者酶可以比较高特异性的识别T碱基和U碱基, 当体系中原料是dNTP时可以正常扩增,而换成dUTP时则无法扩增,当然,反过来也可以,谢谢! 返回小木虫查看更多

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  • 精华评论
  • pennchem

    加入 UNG酶就可以了, 根据你反应温度,加入耐热或不耐热的酶

  • 山舞银蛇

    引用回帖:
    2楼: originally posted by pennchem at 2020-09-14 08:05:25
    加入 ung酶就可以了, 根据你反应温度,加入耐热或不耐热的酶

    我估计你理解错题主的意思了。他应该不是想消化掉模板里的dutp。其实这问题很简单,使用pfu这类酶,是不能把溶液中的dutp掺入产物的。

  • 抽象派单纯

    引用回帖:
    3楼: Originally posted by 山舞银蛇 at 2020-09-14 10:14:50
    我估计你理解错题主的意思了。他应该不是想消化掉模板里的dutp。其实这问题很简单,使用pfu这类酶,是不能把溶液中的dutp掺入产物的。...

    请问PFU酶可以放到扩增体系里吗? 比如我做普通的PCR或者恒温扩增,如果放入pfu酶,是不是就无法扩增dUTP为原料的体系? 如果是正常的dNTP体系就仍然可以扩增

  • 山舞银蛇

    引用回帖:
    4楼: Originally posted by 抽象派单纯 at 2020-09-14 12:44:57
    请问PFU酶可以放到扩增体系里吗? 比如我做普通的PCR或者恒温扩增,如果放入pfu酶,是不是就无法扩增dUTP为原料的体系? 如果是正常的dNTP体系就仍然可以扩增?...

    你用Taq、Tth、Pfu、KOD这些酶做出来的才叫PCR,

    既然用pfu,又怎么会能做恒温扩增呢

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