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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 有什么办法和酶可以防止dUTP扩增，而仅扩增dNTP
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抽象派单纯

新虫 (初入文坛)

[交流] 有什么办法和酶可以防止dUTP扩增，而仅扩增dNTP已有3人参与

最近想做一个筛选。

想问下大家，有没有什么办法或者酶可以比较高特异性的识别T碱基和U碱基， 当体系中原料是dNTP时可以正常扩增，而换成dUTP时则无法扩增，当然，反过来也可以，谢谢！
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1楼2020-09-13 21:28:42
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pennchem

专家顾问 (正式写手)
★
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加入 UNG酶就可以了， 根据你反应温度，加入耐热或不耐热的酶
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行至水穷处，坐看云起时
2楼2020-09-14 08:05:25
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山舞银蛇

铁杆木虫 (正式写手)
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2楼: originally posted by pennchem at 2020-09-14 08:05:25
加入 ung酶就可以了， 根据你反应温度，加入耐热或不耐热的酶

我估计你理解错题主的意思了。他应该不是想消化掉模板里的dutp。其实这问题很简单，使用pfu这类酶，是不能把溶液中的dutp掺入产物的。
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核酸提取与Taqman诊断
3楼2020-09-14 10:14:50
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抽象派单纯

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 山舞银蛇 at 2020-09-14 10:14:50
我估计你理解错题主的意思了。他应该不是想消化掉模板里的dutp。其实这问题很简单，使用pfu这类酶，是不能把溶液中的dutp掺入产物的。...

请问PFU酶可以放到扩增体系里吗？ 比如我做普通的PCR或者恒温扩增，如果放入pfu酶，是不是就无法扩增dUTP为原料的体系？ 如果是正常的dNTP体系就仍然可以扩增？
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4楼2020-09-14 12:44:57
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junjieshao

禁虫 (小有名气)
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5楼2020-09-16 05:17:38
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山舞银蛇

铁杆木虫 (正式写手)
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引用回帖:
4楼: Originally posted by 抽象派单纯 at 2020-09-14 12:44:57
请问PFU酶可以放到扩增体系里吗？ 比如我做普通的PCR或者恒温扩增，如果放入pfu酶，是不是就无法扩增dUTP为原料的体系？ 如果是正常的dNTP体系就仍然可以扩增？...

你用Taq、Tth、Pfu、KOD这些酶做出来的才叫PCR，

既然用pfu，又怎么会能做恒温扩增呢
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核酸提取与Taqman诊断
6楼2020-09-17 08:52:00
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