经常做自杀质粒敲除的大佬来给点建议吧........
最近在做黄单胞菌的基因敲除,用的pk18的自杀质粒,通过三亲接合的方法导入黄单胞菌,做了一个月了,连单交换子都没拿到........,构建好的自杀质粒是验证过的,完全正确。
有做过这个实验的吗?交流一下经验吧..
顺便说一下,我做的是稻黄单胞菌,实验室以前的人就说这个菌不太好做敲除。同组的其它人做野油菜黄单胞菌的敲除就特别容易操作。引起这个差别的原因是什么呀.............
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最近在做黄单胞菌的基因敲除,用的pk18的自杀质粒,通过三亲接合的方法导入黄单胞菌,做了一个月了,连单交换子都没拿到........,构建好的自杀质粒是验证过的,完全正确。
有做过这个实验的吗?交流一下经验吧..
顺便说一下,我做的是稻黄单胞菌,实验室以前的人就说这个菌不太好做敲除。同组的其它人做野油菜黄单胞菌的敲除就特别容易操作。引起这个差别的原因是什么呀.............
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我公司经常用结合方法做细菌敲除
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三亲很难做,电转吧,是西大生科院六楼的同学吧
我们是电转做敲除