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关于标签(tag)蛋白在免疫沉淀中的应用原理,求指点迷津!

作者 Murrayss
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本人接触蛋白免疫不久,看到热电上的关于IP的介绍,里面有一段话阐述了标签蛋白在IP中的应用,一直都不懂,想请教各路大神,标签蛋白在免疫沉淀中应用的原理,谢谢~(链接:https://www.thermofisher.com/cn/zh/home/life-science/protein-biology/protein-biology-learning-center/protein-biology-resource-library/pierce-protein-methods/immunoprecipitation-ip.html)

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  • 精华评论
  • 博士苑

    IP是机制实验的探讨和验证,蛋白与蛋白的相互作用结合,形成复合体调控或是引起结合表位或构型的变化,继而引起功能的发生或关闭,这类属于CO-IP实验可以达成,如果是蛋白与DNA启动子或是RNA(可以是lncRNA、mRNA、环状RNA等),这类属于RIP或是ChIP实验,至于引起标签蛋白,进行IP实验,可以这样理解
    1. 市场未有可直接用于IP实验的抗体,需要在本底蛋白上融合标签蛋白,使用标签抗体或是荧光蛋白抗体等来曲线救国
    2. 市场有对应的抗体,为进一步验证特异结合,使用标签抗体进行重复验证,更细致化的说明结合和调控关系

    对于标签蛋白引起蛋白的功能,这个是有可能的,在原有蛋白的完整结构上,附加额外的蛋白,可能会引起本身蛋白构象的改变,如果导致功能域的改变,那该蛋白的功能会随之变化,这也是我们用标签蛋白一般放在5'或3'端,或是称为C端、N端,尽量降低对本底蛋白构象和功能的影响,

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