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关于标签（tag）蛋白在免疫沉淀中的应用原理，求指点迷津！ 已有2人参与
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本人接触蛋白免疫不久，看到热电上的关于IP的介绍，里面有一段话阐述了标签蛋白在IP中的应用，一直都不懂，想请教各路大神，标签蛋白在免疫沉淀中应用的原理，谢谢~ （链接：https://www.thermofisher.com/cn/zh/home/life-science/protein-biology/protein-biology-learning-center/protein-biology-resource-library/pierce-protein-methods/immunoprecipitation-ip.html） Snipaste_2020-06-30_00-08-03.png |
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河北省自然科学基金
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【答案】应助回帖
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IP是机制实验的探讨和验证，蛋白与蛋白的相互作用结合，形成复合体调控或是引起结合表位或构型的变化，继而引起功能的发生或关闭，这类属于CO-IP实验可以达成，如果是蛋白与DNA启动子或是RNA（可以是lncRNA、mRNA、环状RNA等），这类属于RIP或是ChIP实验，至于引起标签蛋白，进行IP实验，可以这样理解 1. 市场未有可直接用于IP实验的抗体，需要在本底蛋白上融合标签蛋白，使用标签抗体或是荧光蛋白抗体等来曲线救国 2. 市场有对应的抗体，为进一步验证特异结合，使用标签抗体进行重复验证，更细致化的说明结合和调控关系 对于标签蛋白引起蛋白的功能，这个是有可能的，在原有蛋白的完整结构上，附加额外的蛋白，可能会引起本身蛋白构象的改变，如果导致功能域的改变，那该蛋白的功能会随之变化，这也是我们用标签蛋白一般放在5'或3'端，或是称为C端、N端，尽量降低对本底蛋白构象和功能的影响 |
2楼2020-06-30 09:11:35
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好的，谢谢解惑，那么在这个基础上，这些tag蛋白是如何直接标靶到我要免疫沉淀的目标蛋白上的呢？另外图中提到的标记蛋白的缺点是过表达怎么理解呢？有没有相关介绍的经典著作可以介绍一下，万分感谢  发自小木虫Android客户端 |
3楼2020-06-30 12:05:20
junjieshao
禁虫 (小有名气)
感谢参与，应助指数 +1
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4楼2020-07-01 04:57:59
10