有谁用过碧云天的一抗二抗洗脱液吗？
之前买洗脱液的老师找不到说明书了。这个洗脱液我用过一次，当时手动摇了3分钟左右吧，Marker颜色就变的很淡了。因为担心把蛋白洗掉就没有继续stripping了。后来做总蛋白的，还是有条带出来，位置和Stripping前做的磷酸化的蛋白位置一致。但我总担心这个条带会不会有stripping不好而有些部分仍然是磷酸化的可能，因为位置相同我也不好判断。就做过这一次stripping的。有用过碧云天的一抗二抗洗脱液的同仁们给点建议吗？
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我没用过你说的，我是用自己配的stripping buffer。如果你指prestained的marker条带颜色变浅，这很正常。prestained marker的蛋白上结合了染料，stripping可以破坏染料与蛋白的结合，但蛋白应该还在膜上。当然，这要看stripping buffer和strip条件，如果太harsh，可能会把部分蛋白从膜上strip下来。
谢谢你！想再问一下：1、如果marker不太清楚了，还要继续Stripping吗？因为没有什么好的参照来判断我的蛋白会不会被洗掉了呀。2、stripping的时间比较短我又担心之前磷酸化的一抗二抗会不会残留在上面了，从而造成后面Total的假阳性结果。会有这种情况吗？3、我之前做的total的是在Stripping5分钟左右看见marker颜色变淡后停止操作的，后面封闭、孵一抗、二抗的等步骤应该没有问题，那我后来做出来的TOTAL的条带可信吗
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打错了，是stripping3分钟左右。
marker不清楚了没事，只是染色剂脱落了，染色剂也是附着在蛋白表面的。你的目的是strip掉蛋白表面的抗体，你只要按照说明书上操作就可以了。
strip不充分的确会造成一抗残留而影响western的结果。为了检测strip的效果，你可以把strip的膜不孵育一抗，其它按照western步骤来，看看是否有一抗残留。
至于strip过的问题，当然是有可能的。一般情况下，抗原与膜的结合能力是比与抗体结合的强的。strip一般是通过改变pH或者其它条件破坏抗体与抗原的可逆结合。但是，很难说是否有抗原从膜上掉下来，也很难检测。
请问，，你的 stripping buffer 是 TBST 吗
不是，是一抗二抗洗脱液。