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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 有谁用过碧云天的一抗二抗洗脱液吗？
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herjasmine

新虫 (初入文坛)

[求助] 有谁用过碧云天的一抗二抗洗脱液吗？

之前买洗脱液的老师找不到说明书了。这个洗脱液我用过一次，当时手动摇了3分钟左右吧，Marker颜色就变的很淡了。因为担心把蛋白洗掉就没有继续stripping了。后来做总蛋白的，还是有条带出来，位置和Stripping前做的磷酸化的蛋白位置一致。但我总担心这个条带会不会有stripping不好而有些部分仍然是磷酸化的可能，因为位置相同我也不好判断。就做过这一次stripping的。有用过碧云天的一抗二抗洗脱液的同仁们给点建议吗？
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1楼 2013-08-02 17:14:00
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
herjasmine(gyesang代发): 金币+2, 鼓励回帖应助！ 2013-08-03 14:03:54
我没用过你说的，我是用自己配的stripping buffer。如果你指prestained的marker条带颜色变浅，这很正常。prestained marker的蛋白上结合了染料，stripping可以破坏染料与蛋白的结合，但蛋白应该还在膜上。当然，这要看stripping buffer和strip条件，如果太harsh，可能会把部分蛋白从膜上strip下来。
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2楼2013-08-03 00:30:06
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herjasmine

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-08-03 00:30:06
我没用过你说的，我是用自己配的stripping buffer。如果你指prestained的marker条带颜色变浅，这很正常。prestained marker的蛋白上结合了染料，stripping可以破坏染料与蛋白的结合，但蛋白应该还在膜上。当然，这要 ...

谢谢你！想再问一下：1、如果marker不太清楚了，还要继续Stripping吗？因为没有什么好的参照来判断我的蛋白会不会被洗掉了呀。2、stripping的时间比较短我又担心之前磷酸化的一抗二抗会不会残留在上面了，从而造成后面Total的假阳性结果。会有这种情况吗？3、我之前做的total的是在Stripping5分钟左右看见marker颜色变淡后停止操作的，后面封闭、孵一抗、二抗的等步骤应该没有问题，那我后来做出来的TOTAL的条带可信吗？
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3楼2013-08-03 20:12:16
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herjasmine

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by herjasmine at 2013-08-03 20:12:16
谢谢你！想再问一下：1、如果marker不太清楚了，还要继续Stripping吗？因为没有什么好的参照来判断我的蛋白会不会被洗掉了呀。2、stripping的时间比较短我又担心之前磷酸化的一抗二抗会不会残留在上面了，从而造成 ...

打错了，是stripping3分钟左右。
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4楼2013-08-03 20:15:03
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★
herjasmine: 金币+2, ★有帮助, 虽然你只解答了我三个问题中的一个，但是对我还是很有启示的。谢谢啦！ 2013-08-06 22:41:16
引用回帖:
4楼: Originally posted by herjasmine at 2013-08-03 20:15:03
打错了，是stripping3分钟左右。...

marker不清楚了没事，只是染色剂脱落了，染色剂也是附着在蛋白表面的。你的目的是strip掉蛋白表面的抗体，你只要按照说明书上操作就可以了。
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5楼2013-08-04 00:56:18
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖应助！ 2013-08-07 09:15:36
herjasmine: 金币+1, ★★★很有帮助, Good!谢谢！ 2013-08-07 18:17:52
strip不充分的确会造成一抗残留而影响western的结果。为了检测strip的效果，你可以把strip的膜不孵育一抗，其它按照western步骤来，看看是否有一抗残留。
至于strip过的问题，当然是有可能的。一般情况下，抗原与膜的结合能力是比与抗体结合的强的。strip一般是通过改变pH或者其它条件破坏抗体与抗原的可逆结合。但是，很难说是否有抗原从膜上掉下来，也很难检测。
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6楼2013-08-06 22:53:44
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永峰1230

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-08-03 00:30:06
我没用过你说的，我是用自己配的stripping buffer。如果你指prestained的marker条带颜色变浅，这很正常。prestained marker的蛋白上结合了染料，stripping可以破坏染料与蛋白的结合，但蛋白应该还在膜上。当然，这要 ...

请问，，你的 stripping buffer  是 TBST 吗
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12
7楼2014-03-28 08:43:26
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herjasmine

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
7楼: Originally posted by 永峰1230 at 2014-03-28 08:43:26
请问，，你的 stripping buffer  是 TBST 吗...

不是，是一抗二抗洗脱液。
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8楼2014-03-28 20:17:34
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摩都520

铜虫 (小有名气)
楼主好，我用的是odyssey双色红外激光成像系统检测的荧光二抗，碧云天说明书说非化学发光不能检测。我的二抗是不是不能检测。你的是什么二抗呢？谢
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只做一件事，做绝
9楼2014-07-22 22:09:51
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summerliehu

银虫 (小有名气)
颜色掉了，蛋白不一定掉，要是这么轻易把蛋白洗掉，那就不叫洗脱液了
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★★★★★★★★★★★★★★★★★★★★★★欢迎访问【时间管理】版————管理时间，走向成功★★★★★★★★★★★★★★★★★★★★★★
10楼2014-07-24 19:15:55
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