当前位置: 首页 > 分子生物 >大肠杆菌基因组提取时A260/280比值小于1.7,怎么可以使比值升高?

大肠杆菌基因组提取时A260/280比值小于1.7,怎么可以使比值升高?

作者 梧桐柒夕
来源: 小木虫 200 4 举报帖子
+关注

提取方法中采用蛋白酶K温育,10~60min都已尝试,且酶量为40微的10mg/ml,实验中采用磁球进行DNA吸附,洗脱,电泳。电泳图很干净,确定是基因组。但用K5500测得比值偏低,同时A260/230比值低于1.求诸位大神指导。 返回小木虫查看更多

今日热帖
  • 精华评论
  • cicelyzh

    A260/280低说明有蛋白杂质污染。蛋白酶K作用不是除蛋白,是去掉核酸酶活性的。实在不行的话,用酚氯仿抽提后再吸附。A260/230低是因为有有机试剂污染,可能是洗涤时的酒精残余。可以让酒精挥发一会后再洗脱。

  • 梧桐柒夕

    引用回帖:
    2楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-11-10 04:54:08
    A260/280低说明有蛋白杂质污染。蛋白酶K作用不是除蛋白,是去掉核酸酶活性的。实在不行的话,用酚氯仿抽提后再吸附。A260/230低是因为有有机试剂污染,可能是洗涤时的酒精残余。可以让酒精挥发一会后再洗脱。

    现在情况是这样的,我在做一种提基因组的方法研究,目的就是不用酚氯仿,如果调解pH或是温度什么的可以去蛋白么?还有,关于70%乙醇的,挥发半个小时也试过,在测K5500也是放置很久后才测得,这样的时间乙醇依然挥发不尽?

  • cicelyzh

    引用回帖:
    3楼: Originally posted by 梧桐柒夕 at 2013-11-10 12:39:39
    现在情况是这样的,我在做一种提基因组的方法研究,目的就是不用酚氯仿,如果调解pH或是温度什么的可以去蛋白么?还有,关于70%乙醇的,挥发半个小时也试过,在测K5500也是放置很久后才测得,这样的时间乙醇依然挥 ...

    用吸附的方法一般蛋白不会很多,但是有些蛋白与核酸形成复合物,用CTAB法对解离核酸蛋白复合物有一定帮助,用温度、pH之类的方法除蛋白没有听说过。酚氯仿主要可以一定程度上变性蛋白,并从核酸上解离下来,是常用的除去核酸样品中蛋白的方法。
    至于你的乙醇挥发不干净的问题,一般不会,通常离心后再放置几分钟就可以了

  • 梧桐柒夕

    引用回帖:
    4楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-11-10 13:00:59
    用吸附的方法一般蛋白不会很多,但是有些蛋白与核酸形成复合物,用CTAB法对解离核酸蛋白复合物有一定帮助,用温度、pH之类的方法除蛋白没有听说过。酚氯仿主要可以一定程度上变性蛋白,并从核酸上解离下来,是常用 ...

    A260/230值偏低,有时会是小分子如氨基酸、多肽类的影响,如果不是乙醇的影响是此类的么?

猜你喜欢