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western blot 的加养量如何确定以及调整，

作者 lym19890612: 来源: 小木虫 400 8 举报帖子

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根据我这次的实验结果，上面为目的蛋白，下面为内参，想增加目的蛋白的亮度，另外，我想改用1mm的板，合适的上样量体积

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精华评论

cicelyzh

增加上样量的话内参和目的蛋白会的信号会同时增强的。减小目的蛋白一抗的稀释倍数或者加大内参的稀释倍数。
springnamao

你这次的内参还是很亮啊，都连在一起了，可以减少上样量，试试看用1.0的板子，内参亮不亮，最简单的提高目的蛋白亮度的方法不就是提高抗体浓度么，你舍得的话~
rainblue007

1.同意楼上关于抗体稀释的做法；
2.对于您这种相邻泳道条带连接在一起的情况，建议先将凝胶用电泳缓冲液浸泡20~30min，再上样电泳。
lym19890612

引用回帖:
4楼: Originally posted by rainblue007 at 2013-05-13 10:32:21
1.同意楼上关于抗体稀释的做法；
2.对于您这种相邻泳道条带连接在一起的情况，建议先将凝胶用电泳缓冲液浸泡20~30min，再上样电泳。

谢谢哦，我要试试
lym19890612

引用回帖:
3楼: Originally posted by springnamao at 2013-05-13 09:28:33
你这次的内参还是很亮啊，都连在一起了，可以减少上样量，试试看用1.0的板子，内参亮不亮，最简单的提高目的蛋白亮度的方法不就是提高抗体浓度么，你舍得的话~

提高了抗体浓度，效果不好�
，
lym19890612

引用回帖:
4楼: Originally posted by rainblue007 at 2013-05-13 10:32:21
1.同意楼上关于抗体稀释的做法；
2.对于您这种相邻泳道条带连接在一起的情况，建议先将凝胶用电泳缓冲液浸泡20~30min，再上样电泳。

这个倒是挺有用的，这次跑的不连了
rainblue007

引用回帖:
7楼: Originally posted by lym19890612 at 2013-05-19 10:11:38
这个倒是挺有用的，这次跑的不连了...

有用吧。来，叫声师兄听听
别提高抗体浓度啦，减小内参抗体浓度吧，再适当延长曝光时间，好运！