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用考马斯亮蓝法测定菌液中细菌总蛋白浓度，需要对菌液进行怎样的预处理

作者 duoduozuo: 来源: 小木虫 400 8 举报帖子

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用考马斯亮蓝法测定菌液中细菌总蛋白浓度，需要对细菌细菌进行怎样的预处理才能去测定？需要先将细菌从培养基中离心出来再置于缓冲液中再用超声波破碎么？还是新手，希望各位大牛指导。先谢啦！返回小木虫查看更多

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lpl0032

对的！离心收集菌体，冰浴破碎一般一个小时，超高速离心，取上清液
laozuzunzhe

我们超声破碎大概5min，这个条件需要自己摸索，感觉一小时可能太长了。
先离心分理处菌，再用缓冲液清洗一次；
在缓冲液或水中破碎都可以；
破碎后所得上清中蛋白是水溶性的；
不溶的蛋白在沉淀中。
duoduozuo

引用回帖:
2楼: Originally posted by lpl0032 at 2013-02-26 22:10:18
对的！离心收集菌体，冰浴破碎一般一个小时，超高速离心，取上清液

谢谢啦！
duoduozuo

引用回帖:
3楼: Originally posted by laozuzunzhe at 2013-02-27 09:40:06
我们超声破碎大概5min，这个条件需要自己摸索，感觉一小时可能太长了。
先离心分理处菌，再用缓冲液清洗一次；
在缓冲液或水中破碎都可以；
破碎后所得上清中蛋白是水溶性的；
不溶的蛋白在沉淀中。

需要的是细菌的总蛋白，那也需要将沉淀当中的蛋白算在内吧？怎么样进行后续处理才能去测定呢？刚开始接触这个，什么都还不懂，希望您能不吝赐教。谢谢了
laozuzunzhe

引用回帖:
5楼: Originally posted by duoduozuo at 2013-02-27 09:49:49
需要的是细菌的总蛋白，那也需要将沉淀当中的蛋白算在内吧？怎么样进行后续处理才能去测定呢？刚开始接触这个，什么都还不懂，希望您能不吝赐教。谢谢了...

你可以查阅一下相关的文献，查关键词为细菌、总蛋白等文献，应该会对你有帮助，能测出的蛋白总量一般都只是接近真实蛋白总量，如果你不是研究这个测定方法，那就看看文献选一个合适的方法就行了，我因为只测水溶性的，所以也不是很了解总蛋白的测定方法。希望对你有所帮助！

[ Last edited by laozuzunzhe on 2013-2-27 at 13:37 ]
，
zhuqp

需要破碎。
duoduozuo

引用回帖:
6楼: Originally posted by laozuzunzhe at 2013-02-27 13:34:40
你可以查阅一下相关的文献，查关键词为细菌、总蛋白等文献，应该会对你有帮助，能测出的蛋白总量一般都只是接近真实蛋白总量，如果你不是研究这个测定方法，那就看看文献选一个合适的方法就行了，我因为只测水 ...

非常感谢